黃連素對肉雞P-gp和CYP3A mRNA表達及其對口服恩諾沙星藥動學的影響.pdf

1、P-糖蛋白是Abcb1基因編碼的一種ATP依賴性跨膜轉運蛋白。在腫瘤細胞和機體正常組織中均有分布，是造成腫瘤細胞耐藥及動物口服藥物生物利用度差異的重要原因。CYP3A作為一種重要的Ⅰ相藥物代謝酶，臨床中60％以上的藥物都通過CYP3A代謝，其活性高低是造成藥物間相互作用的重要原因。近年來，篩選開發(fā)低毒有效的P-gp抑制劑以提高口服藥物生物利用度和逆轉腫瘤細胞多藥耐藥已成為研究的熱點。中藥黃連素(Berberine)主要成分為小檗堿，具有

2、抗菌譜廣、綠色天然等優(yōu)點，是常用的抗感染治療藥物。目前，有研究發(fā)現(xiàn)黃連素對大鼠P-gp表達和活性具有一定影響，但黃連素對農場動物家禽P-gp的表達及對口服藥物的影響尚未見報道，有待進一步研究。本論文以此為切入點，研究了不同劑量黃連素對內雞肝臟、腎臟和腸道組織中Abcb1 mRNA表達及對口服恩諾沙的星藥動學影響，為獸醫(yī)臨床合理用藥以及P-gp抑制劑的篩選提供參考。
　　首先，本實驗采用RT-PCR方法探究黃連素不同劑量(40和80

3、 mg/kg)與灌服不同時間（1，3和10天）后對肉雞Abcb1和CYP3A mRNA表達的影響。比較肉雞不同組織中Abcb1 mRNA的表達量發(fā)現(xiàn)，其在回腸組織中的表達量最高，且黃連素處理后對肝臟、空腸及回腸Abcb1 mRNA表達的影響較為顯著。與對照組相比，黃連素處理對肝臟Abcb1 mRNA表達具有一定的誘導作用，其中低劑量的黃連素連續(xù)處理3天對肉雞肝臟的誘導作用顯著（P=0.029）;黃連素對腎臟及腸道組織Abcb1 mRNA

4、表達具有不同程度的抑制作用，尤其黃連素處理1天后，對肉雞十二指腸（P=0.036，P=0.008）、空腸（P=0.086）、回腸（P=0.026，P=0.003）和腎臟（P=0.021，P=0.003）Abcb1 mRNA表達均呈顯著抑制作用。黃連素處理后對內雞肝臟、腎臟CYP3A37mRNA表達影響不顯著（P＞0.05）;但經黃連素短時間（1、3天）處理后對十二指腸（P=0.018，P=0.003）、空腸（P=0.032，P=0.01

5、2）和回腸（P=0.016，P=0.014）組織中CYP3A37 mRNA表達有明顯的抑制作用。對不同處理組肉雞CXR mRNA檢測結果顯示:黃連素高、低劑量處理1天后均能顯著抑制十二指腸(P=0.039，P=0.031)、空腸（P=0.030，P=0.034）和回腸（P=0.015，P=0.012）組織中CXR mRNA的表達;高、低劑量黃連素處理肉雞3天后對肝臟CXR mRNA表達水平有一定的誘導作用（P=0.021，P=0.038

6、），CXR mRNA表達變化與Abcb1 mRNA表達變化呈現(xiàn)一定的相關性。
　　其次，為進一步探討黃連素對Abcb1 mRNA表達的影響，我們以Caco-2細胞為研究對象，測定不同濃度黃連素對Caco-2細胞內Abcb1 mRNA表達的影響。首先采用MTT法測定對Caco-2細胞處理24 h的細胞毒性作用，并根據MTT試驗結果選用20和40μM的黃連素處理Caco-2細胞后于不同時間點采集細胞樣品檢測Abcb1mRNA的表達水平

7、，結果表明:黃連素濃度低于200μM時對細胞的生長率沒有影響，當黃連素濃度大于200μM時能夠顯著抑制細胞的生長。低濃度黃連素處理較短時間（2、4和8h）可顯著抑制Abcb1 mRNA的表達，但隨處理時間延長至16h以上時，其影響作用不顯著;高濃度黃連素對Caco-2細胞Abcb1 mRNA表達的影響與黃連素低濃度時相似，同樣在黃連素處理時間較短時能夠顯著抑制細胞Abcb1 mRNA的表達，處理時間較長時抑制作用不明顯。
　　基于

8、黃連素對Abcb1 mRNA表達的影響，本論文進一步探討了不同劑量的黃連素對肉雞口服恩諾沙星藥動學的影響。結果顯示:單劑量口服恩諾沙星后其在肉雞體內的吸收速率常數(shù)(ka)為0.96±0.25，消除半衰期（T1/2ke）為4.19±0.26 h，達峰時間(Tpeak)為2.66±0.45 h，血漿中藥物峰濃度（Cmax）為2.28±0.12μg/mL，藥時曲線下面積（AUC0-∝及AUC0-2h）分別為21.78±1.59和5.30±0.

9、45(μg/mL)*h;經黃連素高、低劑量處理1天可明顯促進恩諾沙星在肉雞體內的吸收，表現(xiàn)為Ka（1.66±0.17、1.78±0.18,P＜0.05），AUC0-∝(28.04±0.54、29.80±1.68,P＜0.05),AUC0-2h(7.07±0.36、7.60±0.58，P＜0.05)及T1/2ke（5.87±0.48、7.57±1.46，P＜0.05）都顯著升高，達峰時間（2.13±0.18、1.78±0.18）雖有所提前