動物源性食品中司帕沙星免疫學快速檢測方法的建立.pdf

1、司帕沙星(Sparfloxacin，SPFX)，是一種抗菌活性強、具有代表性的氟喹諾酮類抗生素藥物，廣泛應用于治療呼吸道、尿路、腸、膽道、皮膚和軟組織感染;司帕沙星在水產養(yǎng)殖也大有用途，能促進黃鱔等快速生長。但是易在動物臟器等組織中形成累積性殘留的司帕沙星，主要通過人們熟知的食物鏈進入到人體，嚴重影響甚至危害到人類健康。本著控制氟喹諾酮類藥物的濫用，保障動物性食品安全和關心大眾健康的宗旨，國內和國外已經開發(fā)出有效的檢測方法，用于監(jiān)測其動

2、態(tài)發(fā)展，但傳統(tǒng)的檢測和監(jiān)測手段相對落后，因此，建立快速、便捷、經濟實惠的檢測方法是滿足監(jiān)督、監(jiān)控司帕沙星濫用的迫切需要。
　　本論文對司帕沙星免疫學特性進行分析和研究，運用單克隆抗體技術制備抗司帕沙星的單抗，開發(fā)了司帕沙星快速檢測的工具即試劑盒，主要研究結果如下:
　　1.司帕沙星人工抗原的制備與鑒定
　　根據(jù)司帕沙星(SPFX)的化學結構和理化性質，采用混合酸酐法和DCC法，將SPFX和載體牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián)

3、，合成免疫原SPFX-BSA，用DCC法將SPFX和卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)，合成包被原SPFX-OVA。對人工合成抗原鑒定主要通過紫外掃描法(UV)、凝膠電泳法(SDS-PAGE)和免疫小鼠獲得多克隆血清的ELISA方法進行鑒定。紫外掃描圖譜顯示，合成的人工抗原的最大紫外吸收峰發(fā)生明顯的位移;SDS-PAGE結果表明免疫原的泳動速度慢于載體蛋白，說明與載體蛋白相比，免疫原的分子量要相對較大;免疫小鼠后所獲得的血清對SPFX具有明顯的敏感

4、性，最終說明SPFX與BSA偶聯(lián)成功，同時實驗結果還證明用混合酸酐法合成的免疫原免疫效果優(yōu)于DCC方法。
　　2.SPFX單克隆抗體的制備及免疫學特性鑒定
　　用SPFX-BSA對4只BALB/C小鼠進行免疫，經檢測，選出1只血清效價高、抑制價好的小鼠成為細胞融合小鼠，利用雜交瘤技術將能分泌SPFX抗體的免疫小鼠脾細胞與能大量繁殖生長的NS0瘤細胞進行相互融合，獲取能分泌SPFX單克隆抗體(mAb)的細胞株。經檢測、篩選、克

5、隆化等系列程序后，獲得一株特異敏感性都較好的雜交瘤細胞株，命名為4H4C8。用體內誘生腹水的方法生產得到SPFX mAb，經過鑒定，4H4C8對SPFX的IC50為27.63ng/mL，與其他同系物或化合物沒有出現(xiàn)明顯的交叉反應。本實驗制備的SPFX mAb能用于檢測動物源性食品中SPFX的殘留。
　　3.司帕沙星免疫快速檢測試劑盒的研發(fā)
　　依據(jù)ELISA原理，在本研究所制備的SPFX mAb的基礎上，優(yōu)化各個實驗條件，研