磺胺二甲基嘧啶單克隆抗體的制備及免疫學快速檢測方法的建立.pdf

1、磺胺類藥物（sulfonamides，SAs）在臨床上主要用于預防和治療細菌感染性疾病，還常作為飼料添加劑在動物生產(chǎn)中長期應用。然而過量使用會引起人過敏性反應，且可能有致癌性，因此在動物性食品中殘留引起生態(tài)環(huán)境污染和人類健康危害的潛在威脅已倍受關(guān)注，而磺胺二甲基嘧啶（SM2）在磺胺類藥物的使用中占有很大比例。因此，研究出一種操作簡便、快速、靈敏的測定SAs殘留的方法，對于畜產(chǎn)品的安檢具有實際意義。 本研究在分析磺胺二甲基嘧啶分子

2、結(jié)構(gòu)和免疫原性的基礎(chǔ)上，運用單克隆抗體技術(shù)生產(chǎn)了單抗，并組裝了其免疫學快速檢測試劑盒。主要研究結(jié)果如下： 1.用重氮化方法將SM2偶聯(lián)于牛血清白蛋白（BSA）和雞卵清蛋白（OVA），合成了人工免疫原BSA-SM2和包被抗原OVA-SM2，通過紫外（UV）、SDS-PAGE和免疫小鼠后抗血清的ELISA鑒定，表明BSA-SM2偶聯(lián)成功，獲得了高價、敏感、特異的抗血清。 2.用BSA-SM2免疫Balb/C小鼠5只，4次免疫

3、后用間接ELISA和阻斷ELISA選擇出細胞融合備用小鼠2只，應用細胞融合技術(shù)篩選出2H10、2E2、2A10、2G5共4株敏感特異的雜交瘤細胞，用體內(nèi)誘生腹水法制備SM2mAb，經(jīng)鑒定，其間接ELISA效價細胞培養(yǎng)上清分別為1：6.4×102、1：6.4×102、1：3.2×102、1：3.2×102，腹水效價分別為1：1.28×105、1：6.4×104、1：3.2×105、1：2.56×105，其中親和力最高的2G5株阻斷ELIS

4、A測定其IC50為5.82ng/ml。 3.應用SM2mAb，依據(jù)酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，組裝了SM2殘留快速檢測阻斷ELISA試劑盒。SM2-Kit的標準曲線呈S型，符合4參數(shù)logit曲線擬合，線性檢測范圍為0.625～80μg/L。靈敏度為0.9μg/L，半數(shù)抑制濃度（IC50）為5.82μg/L，檢測限為1μg/L；飼料樣、豬尿樣的平均添加回收率分別為83.4％、89.5％，平均批內(nèi)和批間變異系數(shù)均低于15％；SM2-Ki