恩諾沙星可視化快速免疫檢測方法的研究.pdf

1、本論文建立了恩諾沙星的膠體金免疫層析試紙條和免疫親和凝膠檢測柱兩種可視化檢測方法，并對量子點免疫層析試紙條檢測方法進行了初步的探索。
　　采用檸檬酸三鈉還原法制備了20 nm的膠體金，優(yōu)化制備金標(biāo)抗體的最佳pH為8，標(biāo)記抗體量為20μg/mL。經(jīng)過優(yōu)化確定的膠體金免疫層析試紙條的最佳工作條件為:包被原和羊抗兔二抗分別按1∶15、1∶100稀釋包被固定于millliporeHF135s硝酸纖維膜上，金標(biāo)抗體1∶7稀釋噴涂到含有0.0

2、5％ SDS-L處理的金標(biāo)墊上。恩諾沙星膠體金免疫層析試紙條方法目測檢測限為2μg/L，檢測時間為10min。與喹諾酮類的其它藥物以及氯霉素、四環(huán)素等常用獸藥沒有交叉反應(yīng)，說明方法具有良好的特異性。牛肉、豬肉、雞肉、鴨肉、蝦肉、魷魚、比目魚、豬肝、牛奶9種食品樣品，只需通過簡單的震蕩提取就可以用于檢測，其中動物組織樣品的檢出限均為20μg/kg，牛奶樣品的檢測限為12μg/L。
　　以瓊脂糖凝膠為固相載體，將恩諾沙星抗體和溴化氰活

3、化的瓊脂糖凝膠偶聯(lián)制備抗體膠作為檢測層，將HRP抗體與溴化氰活化的瓊脂糖凝膠偶聯(lián)制備HRP抗體膠作為質(zhì)控層，制備免疫親和凝膠檢測柱。經(jīng)過優(yōu)化確定最佳工作條件為:抗體膠稀釋倍數(shù)為1∶20、HRP抗體膠稀釋倍數(shù)為1∶400，酶標(biāo)抗原1∶40000稀釋，樣品稀釋液為pH7.4的PBST溶液，孵育時間為1min，加樣體積為1 mL，清洗體積為7 mL。恩諾沙星免疫親和凝膠檢測柱方法的目測檢測限為為5μg/L，檢測時間不超過10 min。與喹諾酮

4、類的其它藥物以及常用獸藥沒有交叉反應(yīng)，方法特異性良好。動物組織樣品檢出限為100μg/kg，牛奶樣品的檢測限為50μg/L。
　　本論文還對恩諾沙星量子點標(biāo)記免疫層析試紙條進行了初步研究，采用活化酯法合成量子點標(biāo)記抗體，經(jīng)優(yōu)化確定NC膜選用MilloporeHF90s，40μL量子點標(biāo)記抗體的復(fù)合物與60μL恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品預(yù)混合上樣。恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品濃度低于40μg/L時，試紙條檢測線與質(zhì)控線顏色目測有明顯差別，當(dāng)恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品濃度