大鼠脊髓慢性壓迫后損傷和修復(fù)規(guī)律的初步探究.pdf

1、目的：建立一種新的大鼠脊髓慢性壓迫性損傷模型，為探索脊髓受壓后的病理生理機(jī)制奠定基礎(chǔ)。探究慢性壓迫損傷后凋亡的規(guī)律，檢測(cè)巢蛋白(神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)志蛋白)在大鼠脊髓慢性損傷后的表達(dá)規(guī)律。 方法：本實(shí)驗(yàn)改進(jìn)了前人的慢性膨脹材料壓迫模型，通過手術(shù)的方式植入壓迫材料，避免了植入過程中的直接損傷。于顯微鏡下，將大鼠胸7，8雙側(cè)椎弓根切斷，取下椎板，植入一種吸水緩膨材料，隨著壓迫物的膨脹，逐漸形成不同程度的慢性壓迫脊髓損傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。40只

2、wista大鼠隨機(jī)分為手術(shù)組30只，對(duì)照組10只。其中對(duì)照組進(jìn)行同樣手術(shù)，但不植入壓迫物。術(shù)后觀察，如大鼠出現(xiàn)雙下肢癱瘓癥狀，考慮為術(shù)中損傷所致，處死，不列入統(tǒng)計(jì)。術(shù)后青霉素抗炎治療5天。手術(shù)后在第1，3，7，14，28天通過BBB評(píng)分進(jìn)行行為學(xué)功能評(píng)定，檢測(cè)壓迫段脊髓病理標(biāo)本及通過電腦圖像分析系統(tǒng)半定量檢測(cè)凋亡啟動(dòng)基因P53及應(yīng)用TUNEL染色檢測(cè)凋亡。免疫組化技術(shù)檢測(cè)nestin(巢蛋白)。 結(jié)果：術(shù)后觀察行為學(xué)、組織學(xué)、病

3、理學(xué)上的改變，三者相符合。大鼠脊髓慢性壓迫模型成立。凋亡細(xì)胞主要分布在白質(zhì)縱向傳導(dǎo)束上脫髓鞘的區(qū)域，主要為少突膠質(zhì)細(xì)胞。第一天即出現(xiàn)了凋亡的表達(dá)，第三天表達(dá)達(dá)到一個(gè)高峰，持續(xù)到第七天，后下降。P53原位雜交結(jié)果顯示，手術(shù)后第1天神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)了陽性表達(dá)，以第3天的表達(dá)升高最明顯，至第7天時(shí)達(dá)到一高峰，后穩(wěn)定在一較平穩(wěn)水平。慢性損傷后，nestin主要表達(dá)于室管膜及其周圍。損傷后的第一天nestin即開始表達(dá)，傷后一周達(dá)高峰，兩周

4、開始下調(diào)，28天時(shí)幾乎無表達(dá)。 結(jié)論：此模型較以往模型相比，具有制作簡(jiǎn)單，損傷程度可調(diào)整，脊髓損傷能表現(xiàn)出不同的壓迫程度，可重復(fù)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。為進(jìn)一步研究脊髓慢性壓迫損傷病理機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。慢性壓迫性脊髓損傷可導(dǎo)致大量的細(xì)胞凋亡，同時(shí)激活內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制，使脊髓發(fā)生適應(yīng)性改變。凋亡最早起于膠質(zhì)細(xì)胞，脊髓微環(huán)境的改變引起了神經(jīng)細(xì)胞的改變。凋亡基因的啟動(dòng)早于大鼠脊髓的病理生理改變及行為學(xué)改變，為臨床早期減壓提供了一定的理論依據(jù)。損傷后，