應(yīng)用分子開關(guān)識別23S rRNA基因突變檢測肺炎支原體對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的敏感性.pdf

1、目的：檢測自南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院兒科住院患兒中分離培養(yǎng)的肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae, MP）臨床株對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的敏感性，用基于高保真聚合酶和3’硫化修飾引物的分子開關(guān)行PCR擴增，建立一種快速、準(zhǔn)確、靈敏的檢測MP23S rRNA基因突變的新方法，指導(dǎo)臨床合理用藥治療MP感染。
　　方法：收集2010年~2012年南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院兒科住院516例患兒咽拭子標(biāo)本，用支原體SP4液體培養(yǎng)基進行分離

2、培養(yǎng)，CM401瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)支原體菌落進行純化，并通過PCR進行篩選和進一步鑒定。采用微量稀釋法檢測5種常用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素（14元環(huán)抗生素紅霉素、克拉霉素；15元環(huán)的阿奇霉素、交沙霉素和16元環(huán)的吉他霉素）對MP臨床分離株的藥物敏感性。并用高保真聚合酶和3’硫化修飾引物的分子開關(guān)行PCR擴增，檢測是否存在MP23S rRNA2063、2064和2617三個熱點突變，通過基因測序進一步確定是否存在點突變。分析點突變與大環(huán)內(nèi)酯類抗生素敏

3、感性之間的關(guān)系。
　　結(jié)果：516例呼吸道感染患兒咽拭子標(biāo)本共分離培養(yǎng)出21株MP，分離陽性率為4.07％（21/516）；PCR擴增出49例陽性，檢出率為9.50%（49/516）。21株MP中，僅2株大環(huán)內(nèi)酯類抗生素敏感株，19株為高度耐藥株，耐藥率為90.5%（19/21），未檢測出中度耐藥株。5種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素中，MP對14元環(huán)的紅霉素和克拉霉素耐藥程度最高，其MIC≥128 mg/L；對15元環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素阿奇霉

4、素和交沙霉素相對敏感，其中交沙霉素抗 MP活性最高，其 MIC≤4 mg/L。用高保真聚合酶和3’硫化修飾引物的分子開關(guān)行 PCR擴增，檢測出17株發(fā)生了2063位點基因突變，2株發(fā)生2064位點基因突變，未檢測出2617位點突變。用基因測序檢測到17株MP發(fā)生A2063G的突變，2株發(fā)生A2064G的突變，未檢測到2617位點突變，與分子開關(guān)的檢測結(jié)果一致，而且2063、2064 位點突變MP株均對大環(huán)內(nèi)酯類藥物高度耐藥。<