露蜂房蛋白[NVP(1)]抑制HepG2細(xì)胞增殖的機(jī)制研究.pdf

1、胡蜂亦稱黃蜂，膜翅目(Hymenoptera)胡蜂科(Vespidae)胡蜂屬(Polistes),體烏黑發(fā)亮，有黃條紋和成對(duì)的斑點(diǎn)。胡蜂廣泛分布在我國大部分山區(qū),露蜂房為其巢，其中存在大量的抗癌活性物質(zhì)。研究露蜂房蛋白質(zhì)對(duì)抗癌細(xì)胞增殖的藥物開發(fā)具有重要意義。但露蜂房蛋白質(zhì)的種類較多,成分復(fù)雜，很難分離純化出一個(gè)單一的蛋白質(zhì),目前國內(nèi)外對(duì)其研究少有報(bào)道,本研究從露蜂房中分離出一個(gè)新的蛋白質(zhì),并深入地研究了其藥理特性,完成的工作主要包括以

2、下幾個(gè)方面: 1.利用雙蒸水長時(shí)間4℃浸提,硫酸銨沉淀,0.22 μm的濾膜透析脫鹽,Sephdex-G50凝膠過濾,反相高效液相色譜層析等方法,從露蜂房中分離純化出一種蛋白質(zhì),質(zhì)譜分析其分子量為6.6 kD,并定義它為NVP(1)。 2.研究了NVP(1)調(diào)節(jié)HepG2細(xì)胞的增殖機(jī)制。6.6 μg/ml NVP(1) 抑制HepG2細(xì)胞增殖作用發(fā)生在細(xì)胞周期的G1期,并且抑制 cyclin B，cyclin D1和cy

3、clin E mRNA的表達(dá)，NVP(1)也抑制了cdk2蛋白質(zhì)的表達(dá)，但能增加p27，p21蛋白質(zhì)的表達(dá)；此外，NVP(1)不能明顯改變p16蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。通過細(xì)胞核染色質(zhì)濃縮檢測發(fā)現(xiàn)，NVP(1)可促進(jìn)HepG2細(xì)胞凋亡。此外，NVP(1)激活了細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶(ERK)信號(hào)通路，當(dāng)HepG2細(xì)胞提前用ERK的特異性抑制劑處理后，p-ERK蛋白質(zhì)的表達(dá)量明顯降低。這些結(jié)果表明，NVP(1)抑制HepG2細(xì)胞增殖是通過激活ERK信號(hào)

4、通路，NVP(1)有可能成為肝癌治療的一種潛在的藥物。 3. 研究rSK3，rIK通道在細(xì)胞增殖中的作用。NVP(1)，能抑制Hek-293細(xì)胞增殖。Southern-blot檢測轉(zhuǎn)基因rSK3，rIK 成功，轉(zhuǎn)rSK3，rIK基因后，能消減NVP(1)抗細(xì)胞增殖的作用，rSK3，rIK促進(jìn)細(xì)胞增殖。 4.研究了NVP(1)對(duì)大鼠支氣管平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用及其機(jī)制。用原代細(xì)胞培養(yǎng)，MTT法，流式細(xì)胞和免疫印跡檢測細(xì)胞