復(fù)合乳酸菌對(duì)不同營(yíng)養(yǎng)途徑治療的重癥急性胰腺炎大鼠腸屏障功能的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:旨在建立適用于研究重癥急性胰腺炎(SAP)治療的大鼠模型；并基于此模型，觀察復(fù)合乳酸菌對(duì)早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)(EEN)和腸外營(yíng)養(yǎng)(PN)治療的SAP大鼠腸屏障功能的影響，深入探討其作用機(jī)制。 方法: 1.構(gòu)建大鼠SAP模型 92只SD大鼠(體重200±10克)，隨機(jī)分為假手術(shù)組(共20只，分6、12、24和48h4個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察組，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)組為5只)、造模組(共72只，其中20只分6、12、24和48h4個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀

2、察組，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)組為5只；加上其余52只，用于觀察死亡率)。采用胰腺被膜下均勻注射3.8％?；悄懰徕c造模，比較對(duì)照組和造模組4個(gè)時(shí)間點(diǎn)血清淀粉酶和胰腺病理的情況，統(tǒng)計(jì)造模組死亡率的情況。 2.復(fù)合乳酸菌對(duì)不同營(yíng)養(yǎng)途徑治療的SAP大鼠腸屏障功能的影響及其機(jī)制研究96只SD大鼠(體重200±10克)，隨機(jī)分為假手術(shù)早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)治療組(Sham-EEN)、早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)治療組(EEN)、早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)加復(fù)合乳酸菌治療組(EEN+Lac)；

3、假手術(shù)腸外營(yíng)養(yǎng)治療組(Sham-PN)、腸外營(yíng)養(yǎng)治療組(PN)、腸外營(yíng)養(yǎng)加復(fù)合乳酸菌組(PN+Lac)，每組16只，分別于第4d(8只)和第7d(8只)取材，檢測(cè)肝和腸系膜淋巴結(jié)腸道菌群易位、血漿內(nèi)毒素、腸轉(zhuǎn)運(yùn)功能、二胺氧化酶(DAO)、Tunnel法測(cè)定小腸上皮細(xì)胞凋亡、免疫組化法和實(shí)時(shí)定量PCR法測(cè)定腸上皮緊密結(jié)合蛋白Occludin蛋白的表達(dá)及mRNA含量、ELISA法測(cè)定小腸黏液SIgA含量、BCA法測(cè)定小腸粘膜蛋白含量，從多個(gè)

4、角度來研究復(fù)合乳酸菌對(duì)不同營(yíng)養(yǎng)途徑治療的SAP大鼠腸道功能的影響及其機(jī)制。 3.復(fù)合乳酸菌對(duì)不同營(yíng)養(yǎng)途徑治療的SAP大鼠細(xì)胞因子平衡作用研究方法同第2部分，分別在第4d和第7d取材，采用ELISA方法檢測(cè)血清促炎因子TNF-α和抗炎因子IL-10的水平，評(píng)價(jià)IL-10/TNF-α的平衡狀態(tài)。 4.統(tǒng)計(jì)方法資料各組間滿足方差齊性的要求，則直接進(jìn)行單因素方差分析；若不滿足，則酌情采用變量變換，對(duì)變換后的指標(biāo)進(jìn)行單因素方差分析

5、；若方差分析拒絕HO，則使用Scheff法進(jìn)行各組間的兩兩比較。采用Pearson相關(guān)系數(shù)衡量變量間相關(guān)程度的大小。細(xì)菌易位采用確切概率法。數(shù)據(jù)采用STATA9.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論: 1.SAP大鼠動(dòng)物模型的建立：采用胰被膜下均勻注射3.8％?；悄懰徕c，該方法可成功建立SAP動(dòng)物模型，重復(fù)性好，病情呈漸進(jìn)性發(fā)展，適用于進(jìn)行SAP的營(yíng)養(yǎng)治療研究。 2.復(fù)合乳酸菌對(duì)不同營(yíng)養(yǎng)途徑治療的

6、SAP大鼠腸屏障功能的影響及其機(jī)制研究 (1)加用復(fù)合乳酸菌的EEN可以顯著改善SAP大鼠腸屏障功能，減少腸內(nèi)細(xì)菌和內(nèi)毒素易位的發(fā)生。 (2)加用復(fù)合乳酸菌的EEN可對(duì)SAP大鼠腸屏障功能的保護(hù)作用機(jī)制可能與促進(jìn)腸轉(zhuǎn)運(yùn)功能，增加腸粘膜蛋白的合成，減少上皮細(xì)胞的凋亡，增加腸上皮緊密結(jié)合蛋白mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)，增加腸粘膜局部免疫功能有關(guān)； (3)加用復(fù)合乳酸菌的PN治療可以改善SAP及長(zhǎng)期PN治療對(duì)大鼠腸屏障的損

7、害，機(jī)制可能與促進(jìn)腸轉(zhuǎn)運(yùn)功能，增加腸粘膜蛋白的合成，減少上皮細(xì)胞的凋亡，增加腸上皮緊密結(jié)合蛋白mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)，增加腸粘膜局部免疫功能有關(guān)； (4)EEN在維護(hù)SAP大鼠腸屏障方面的作用優(yōu)于PN。 3.復(fù)合乳酸菌對(duì)不同營(yíng)養(yǎng)途徑治療的SAP大鼠細(xì)胞因子平衡作用研究 (1)加用復(fù)合乳酸菌的EEN可以顯著改善SAP大鼠細(xì)胞因子平衡的狀態(tài)； (2)加用復(fù)合乳酸菌PN可以改善單純PN治療的SAP大鼠細(xì)胞因子平