兔胚胎干細胞及分泌液在動物創(chuàng)傷模型上初步應(yīng)用.pdf

1、本研究旨在體外分離培養(yǎng)兔胚胎干細胞，初步研究兔胚胎干細胞對軟組織創(chuàng)面是否具有促愈作用，為兔胚胎干細胞在創(chuàng)傷修復(fù)中的應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ);探討兔胚胎干細胞分泌物在體外對動物機體創(chuàng)面的愈合作用;探討兔胚胎干細胞分泌物在不同種屬之間是否存在特異性以及對待不同的創(chuàng)傷是否有促進愈合的作用，為兔胚胎干細胞培養(yǎng)液在創(chuàng)傷修復(fù)中的應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)。試驗方法、結(jié)果和結(jié)論如下:
　　1.兔胚胎干細胞的分離、傳代
　　選擇自然發(fā)情母兔與公兔自然交配，配

2、種后90h手術(shù)沖胚。對原代培養(yǎng)采取酶消化法，對細胞形態(tài)及變化進行觀察，取生長良好的兔胚胎干細胞接種在飼養(yǎng)層上，在38℃、5％CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
　　2.兔胚胎干細胞培養(yǎng)液的提取
　　當(dāng)ES細胞傳代穩(wěn)定，開始使用胰酶消化傳代法，即:吸去培養(yǎng)液。此時把吸去的培養(yǎng)液收集起來裝入到離心管里進行離心:4000rpm*5分鐘抽取上清液。將上清液-20℃凍起來
　　3.構(gòu)建日本大耳白兔組織缺損創(chuàng)面模型
　　4.構(gòu)建日本大

3、耳白兔眼部組織創(chuàng)傷模型
　　5.構(gòu)建日本大耳白兔燒傷模型
　　6.構(gòu)建大鼠軟組織缺損創(chuàng)面模型
　　通過實驗得到如下結(jié)果:
　　1、在日本大耳白兔組織缺損創(chuàng)面模型中，注射兔胚胎干細胞的右側(cè)傷口和沒有注射兔胚胎干細胞的左側(cè)傷口比較，右側(cè)的傷口愈合速度要快。注射兔胚胎干細胞的右側(cè)傷口愈合速度和注射兔胚胎干細胞培養(yǎng)液的左側(cè)傷口比較，兩者愈合速度沒有明顯的區(qū)別。
　　2、在日本大耳白兔眼部組織創(chuàng)面模型中，滴注兔胚胎干

4、細胞培養(yǎng)液的右側(cè)眼睛和沒有滴注兔胚胎干細胞培養(yǎng)液的左側(cè)眼睛比較，右側(cè)眼睛的炎癥反應(yīng)消退的快。
　　3、在日本大耳白兔燒傷模型中，注射兔胚胎干細胞培養(yǎng)液的右側(cè)傷口和沒有注射兔胚胎干細胞培養(yǎng)液的左側(cè)相比較，右側(cè)的傷口愈合速度要快。
　　4、在構(gòu)建大鼠軟組織缺損創(chuàng)面中，注射兔胚胎于細胞培養(yǎng)液的右側(cè)傷口和沒有注射兔胚胎干細胞培養(yǎng)液的左側(cè)傷口比較，右側(cè)的傷口愈合速度要快且沒有出現(xiàn)排斥反應(yīng)。
　　通過實驗得到的結(jié)論
　　挑破