膽固醇在PAMAM介導(dǎo)的基因傳遞過(guò)程中的作用.pdf

1、聚酰胺-胺（PAMAM，polyamidoamine）以其獨(dú)有的分子結(jié)構(gòu)和物理特性，能夠通過(guò)靜電疏水等作用與DNA緊密結(jié)合，并將其縮聚，保護(hù)DNA不被降解，是近年來(lái)廣泛使用的非病毒基因治療載體。但是相比病毒載體，PAMAM的轉(zhuǎn)染效率仍然很低，這是由于它在轉(zhuǎn)染過(guò)程中存在多個(gè)屏障。對(duì)于PAMAM/DNA復(fù)合物與細(xì)胞結(jié)合并進(jìn)入細(xì)胞的具體機(jī)制的理解，克服PAMAM轉(zhuǎn)染過(guò)程的細(xì)胞膜屏障，將有助于我們找到提高PAMAM轉(zhuǎn)染效率方法。 本文

2、采用卵磷脂脂質(zhì)體模擬細(xì)胞膜骨架，并在其中加入膽固醇單組分，通過(guò)等溫微量量熱法，Zeta電勢(shì)和透射電子顯微鏡，對(duì)PAMAM/DNA復(fù)合物與脂質(zhì)體的相互作用進(jìn)行考察，探索PAMAM/DNA復(fù)合物與脂質(zhì)體膜的作用機(jī)制，以及膽固醇在其中所起到的作用。 熱力學(xué)研究表示，對(duì)于含有和不含有膽固醇的脂質(zhì)體，PAMAM/DNA復(fù)合物主要通過(guò)靜電作用與其表面結(jié)合，反應(yīng)由焓驅(qū)動(dòng)，膽固醇的加入將使結(jié)合在表面的PAMAM/DNA復(fù)合物能夠嵌入脂雙層中，

3、從而引起焓變、熵變的增大，甚至出現(xiàn)聚集的吸熱過(guò)程。PAMAM/DNA復(fù)合物的電荷比大于1時(shí)，脂質(zhì)體的負(fù)電勢(shì)隨著PAMAM/DNA復(fù)合物的加入而減小，說(shuō)明兩者通過(guò)靜電作用結(jié)合，膽固醇在靜電結(jié)合的過(guò)程中沒(méi)有作用。通過(guò)電鏡觀察，對(duì)于不加膽固醇的脂質(zhì)體，PAMAM/DNA復(fù)合物結(jié)合在脂質(zhì)體表面，可以看到兩球結(jié)合的狀態(tài)，對(duì)于加入膽固醇的脂質(zhì)體，PAMAM/DNA復(fù)合物進(jìn)入脂質(zhì)體內(nèi)部，脂質(zhì)體粒徑增大，仍為球狀。各種檢測(cè)均表明.PAMAM/DNA復(fù)合