HCV1b基因型Core與NS4B蛋白對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)1b基因型核心蛋白(Core)與非結(jié)構(gòu)蛋白4B(Nonstructural protein4B,NS4B)對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡的影響，以初步探索HCV1b基因型Core、NS4B與HepG2細(xì)胞凋亡的關(guān)系及其可能的相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　利用脂質(zhì)體介導(dǎo)將 HCV1b基因型 Core與NS4B的重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)-Core、pcDN

2、A3.1(-)-NS4B分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，同時(shí)以轉(zhuǎn)染空載體pcDNA3.1(-)和未轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞作對(duì)照(四組細(xì)胞分別命名為：pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組、pcDNA3.1(-)組及空白對(duì)照組)；轉(zhuǎn)染48h后，用RT-PCR及Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中Core與NS4B mRNA及蛋白的表達(dá)；并在有無(wú)TNF-α的因素下，MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，觀察Core與N

3、S4B對(duì)HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡情況；運(yùn)用RT-PCR及Western Blot檢測(cè)各組細(xì)胞中活化型Caspase-3及XIAPmRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)-Core、pcDNA3.1(-)-NS4B分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，RT-PCR及Western Blot檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá)HCV Core、NS4B mRNA及蛋白。
　

4、　2.RT-PCR及Western Blot檢測(cè)到未用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細(xì)胞的活化型Caspase-3的mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)量均低于pcDNA3.1(-)組及空白對(duì)照組(p<0.01)，XIAP的mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)量均高于pcDNA3.1(-)組及空白對(duì)照組(p<0.01)；用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)

5、-NS4B組HepG2細(xì)胞的活化型Caspase-3的mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)量均高于pcDNA3.1(-)組及空白對(duì)照組(p<0.01)，XIAP的mRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)量均低于pcDNA3.1(-)組及空白對(duì)照組(p<0.01)；與未使用TNF-α處理的四組細(xì)胞相比，用TNF-α處理的四組細(xì)胞的活化型Caspase-3的mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯升高(p<0.01)，且pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-

6、NS4B組細(xì)胞的XIAP的mRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)量減少(p<0.01)，pcDNA3.1(-)組及空白對(duì)照組細(xì)胞的XIAP的mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)量增加(p<0.01)。其余組間的細(xì)胞的mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)量相比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.MTT法檢測(cè)到轉(zhuǎn)染后1~5天，pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細(xì)胞的死亡率均小于pcDNA3.1(-)組與空白對(duì)照組(p<0

7、.01)；用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細(xì)胞的死亡率均大于pcDNA3.1(-)組與空白對(duì)照組(p<0.01)；與未使用TNF-α處理的四組細(xì)胞相比，用TNF-α處理的四組細(xì)胞的死亡率明顯增加(p<0.01)。其余組間的細(xì)胞死亡率相比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組H

8、epG2細(xì)胞凋亡率均低于pcDNA3.1(-)組及空白對(duì)照組(p<0.01)；用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細(xì)胞的凋亡率均高于pcDNA3.1(-)組與空白對(duì)照組(p<0.01)；與未使用TNF-α處理的四組細(xì)胞相比，用TNF-α處理的四組細(xì)胞的凋亡率明顯升高(p<0.01)。其余組間的細(xì)胞凋亡率相比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.H