HCV1b基因型Core與NS4B蛋白對HepG2細胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)1b基因型核心蛋白(Core)與非結(jié)構(gòu)蛋白4B(Nonstructural protein4B,NS4B)對HepG2細胞凋亡的影響，以初步探索HCV1b基因型Core、NS4B與HepG2細胞凋亡的關(guān)系及其可能的相關(guān)機制。
　　方法：
　　利用脂質(zhì)體介導(dǎo)將 HCV1b基因型 Core與NS4B的重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)-Core、pcDN

2、A3.1(-)-NS4B分別瞬時轉(zhuǎn)染HepG2細胞，同時以轉(zhuǎn)染空載體pcDNA3.1(-)和未轉(zhuǎn)染的HepG2細胞作對照(四組細胞分別命名為：pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組、pcDNA3.1(-)組及空白對照組)；轉(zhuǎn)染48h后，用RT-PCR及Western Blot檢測轉(zhuǎn)染細胞中Core與NS4B mRNA及蛋白的表達；并在有無TNF-α的因素下，MTT法檢測各組細胞的生長情況，觀察Core與N

3、S4B對HepG2細胞生長的影響；利用流式細胞術(shù)檢測各組細胞的凋亡情況；運用RT-PCR及Western Blot檢測各組細胞中活化型Caspase-3及XIAPmRNA及蛋白的相對表達水平。
　　結(jié)果：
　　1.重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)-Core、pcDNA3.1(-)-NS4B分別瞬時轉(zhuǎn)染HepG2細胞，RT-PCR及Western Blot檢測到細胞內(nèi)成功表達HCV Core、NS4B mRNA及蛋白。
　

4、　2.RT-PCR及Western Blot檢測到未用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細胞的活化型Caspase-3的mRNA及蛋白的相對表達量均低于pcDNA3.1(-)組及空白對照組(p<0.01)，XIAP的mRNA及蛋白的相對表達量均高于pcDNA3.1(-)組及空白對照組(p<0.01)；用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)

5、-NS4B組HepG2細胞的活化型Caspase-3的mRNA及蛋白的相對表達量均高于pcDNA3.1(-)組及空白對照組(p<0.01)，XIAP的mRNA及蛋白相對表達量均低于pcDNA3.1(-)組及空白對照組(p<0.01)；與未使用TNF-α處理的四組細胞相比，用TNF-α處理的四組細胞的活化型Caspase-3的mRNA及蛋白的相對表達量明顯升高(p<0.01)，且pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-

6、NS4B組細胞的XIAP的mRNA及蛋白相對表達量減少(p<0.01)，pcDNA3.1(-)組及空白對照組細胞的XIAP的mRNA及蛋白的相對表達量增加(p<0.01)。其余組間的細胞的mRNA及蛋白的相對表達量相比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.MTT法檢測到轉(zhuǎn)染后1~5天，pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細胞的死亡率均小于pcDNA3.1(-)組與空白對照組(p<0

7、.01)；用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細胞的死亡率均大于pcDNA3.1(-)組與空白對照組(p<0.01)；與未使用TNF-α處理的四組細胞相比，用TNF-α處理的四組細胞的死亡率明顯增加(p<0.01)。其余組間的細胞死亡率相比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　4.流式細胞術(shù)檢測到pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組H

8、epG2細胞凋亡率均低于pcDNA3.1(-)組及空白對照組(p<0.01)；用TNF-α處理的pcDNA3.1(-)-Core組、pcDNA3.1(-)-NS4B組HepG2細胞的凋亡率均高于pcDNA3.1(-)組與空白對照組(p<0.01)；與未使用TNF-α處理的四組細胞相比，用TNF-α處理的四組細胞的凋亡率明顯升高(p<0.01)。其余組間的細胞凋亡率相比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.H