骨髓來源肝干細胞成瘤性的研究.pdf

1、近來國內(nèi)外的研究發(fā)現(xiàn)，當肝臟受到嚴重或慢性損害時，某些骨髓干細胞被招募到肝臟中，分化成為肝細胞和膽管細胞而參與肝再生，這些干細胞被稱為"骨髓來源肝干細胞"。通過動員自身或移植外來的骨髓來源肝干細胞來促進肝再生，在某些終末期肝病和先天性肝代謝性疾病中可能具有治療價值。但是，肝干細胞也可能發(fā)展成為肝癌。我們假設骨髓來源肝干細胞是肝癌的細胞來源之一，在致癌因素的作用下，招募到肝臟中的骨髓來源肝干細胞過度增生、突變率增加；肝臟細胞外基質(zhì)成分的改

2、變和結(jié)構(gòu)的破壞導致干細胞分化過程受阻而癌變。本實驗首先用含5％淤膽血清的培養(yǎng)基誘導骨髓間充質(zhì)干細胞成肝干細胞，然后將這些骨髓來源肝干細胞接種到裸鼠體內(nèi)，以驗證其是否具有成瘤性。本研究將為肝干細胞在肝臟疾病中的安全應用和了解肝癌的細胞來源提供科學依據(jù)。 目的：探討用含5％淤膽血清培養(yǎng)基誘導的大鼠骨髓來源性肝干細胞(rat bone marrov-derived liyer stem cells，rBDLSCs)是否具有成瘤性。

3、 方法：無菌結(jié)扎大鼠膽總管建立淤膽動物模型，10天后取其血清并測其中總膽紅素濃度。用含5％該血清的培養(yǎng)基誘導大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells，rBMSCs)向肝干細胞(1iver stem cells，LSCs)方向分化。誘導過程中在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的變化；用免疫熒光法鑒定細胞角質(zhì)蛋白18(cytokeratin 18，CKl8)、甲胎蛋白(alpha fet

4、oprotein，AFP)和白蛋白(Albumin，ALB)在這些細胞中的表達；用糖原PAS染色法了解細胞內(nèi)糖原貯存情況；用二乙酰-肟法檢測細胞培養(yǎng)液中的尿素氮濃度。將誘導成的rBDLSCs接種子裸鼠皮下，移植一個月后觀察局部有無腫物形成并取接種部位的局部組織進行化學染色。 結(jié)果：結(jié)扎膽總管10天后取得的大鼠血清總膽紅素濃度為113.6±27.4mmol/L。用含5％淤膽血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞，4天后出現(xiàn)細胞集落，