黃芩苷提取工藝優(yōu)化及其抗馬立克氏病病毒的作用研究.pdf

1、病毒性腫瘤病是一種自然性的常發(fā)病，嚴(yán)重的危害畜禽健康的重要疾病。腫瘤性疾病導(dǎo)致了畜禽的生產(chǎn)性能的下降，甚至死亡，對養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)造成了嚴(yán)重的損失。家禽T細(xì)胞的淋巴瘤就是主要由馬立克氏病所引起，主要是對家禽體內(nèi)的病毒提取出的樣品進(jìn)行診斷，做出判斷。病毒是不斷變異并且發(fā)展著的，馬立克氏病的毒性也隨之增強(qiáng)，疫苗的注射作用也是有局限性，所以，馬立克氏病的防控以后還會(huì)遇到更多挑戰(zhàn)。抗病毒方面，中藥有不易出現(xiàn)耐藥性、組分多、途徑多、靶點(diǎn)也多的獨(dú)特優(yōu)勢

2、。據(jù)藥理學(xué)研究報(bào)道，具有抗微生物、抗病毒、保肝、利膽和鎮(zhèn)靜等作用的黃芩苷，具有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。為了深入探討黃芩苷的生物學(xué)活性，本研究擬探討黃芩苷的提取工藝，建立黃芩苷的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；以雞馬立克氏病為模型，進(jìn)行黃芩苷體外、體內(nèi)抗馬立克氏病病毒試驗(yàn)，系統(tǒng)研究黃芩苷的抗病毒活性，并進(jìn)一步闡明其作用機(jī)理，為臨床獲取能有效控制病毒所致腫瘤性疾病的黃酮類化合物提供依據(jù)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴黃芩苷含量測定方法建立：采用紫外分光光度法，以

3、黃芩苷的標(biāo)準(zhǔn)品為原料，278nm處測定其吸光度，建立吸光度和濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=0.0625C+0.005， R2=0.9995。精密性、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收均符合要求。⑵正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選黃芩苷的提取工藝：采用熱水煎煮提取法，通過三水平三因素的正交試驗(yàn)優(yōu)化其提取因素，方差分析結(jié)果顯示，提取次數(shù)為2次，料液比為1:25，煎煮時(shí)間為50 min時(shí)，黃芩苷的提取率最高，達(dá)到20.36％。⑶黃芩苷對雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）最大

4、安全濃度的測定：黃芩苷在中、低濃度能夠促進(jìn)CEF細(xì)胞的貼壁和生長且對CEF細(xì)胞的作用都是具有時(shí)效性的，應(yīng)用了細(xì)胞病變的觀察法和MTT法，測得了黃芩苷對CEF最大的安全濃度為312.5μg/mL。⑷MDV細(xì)胞半數(shù)感染量(TCID50）測定：MDV的半數(shù)感染量TCID50為10-4.5/0.1 mL。⑸黃芩苷體外抗MDV作用結(jié)果：增值抑制、感染阻斷和直接殺滅三種不同給藥途徑下，黃芩苷濃度在78.13~312.5μg/mL范圍時(shí)都具有較好的抗

5、病毒感染作用，并且感染阻斷途徑下黃芩苷濃度為156.25~312.5μg/mL時(shí)能夠促進(jìn)細(xì)胞的生長、直接滅活途徑下，黃芩苷在濃度312.5μg/mL的時(shí)候能夠促進(jìn)細(xì)胞的生長。⑹黃芩苷體內(nèi)抗MDV作用結(jié)果：通過利巴韋林組，黃芩苷高、中、低劑量組，病毒感染對照組的統(tǒng)計(jì)，正常對照組的死亡日齡數(shù)、腫瘤發(fā)生率、試驗(yàn)前后雞體重變化情況等，明顯得出黃芩苷高、中劑量組對病毒延緩發(fā)生優(yōu)于陽性對照組和黃芩苷的低劑量組；通過觀察各組器官組織切片，也能直觀的說