血管生成抑制劑硝羥喹啉衍生物的設(shè)計(jì)、合成及藥理活性研究.pdf

1、文章主要從以下幾方面進(jìn)行了論述。
　　第一部分硝羥喹啉衍生物的設(shè)計(jì)與合成。
　　目的：在前期研究的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)、合成新的硝羥喹啉衍生物。
　　方法：將8-羥基喹啉置于濃鹽酸和37％甲醛的體系中，持續(xù)通HCl氣體10h，得到5-氯甲基-8-羥基喹啉(a1)，然后和苯胺、吡啶胺等芳香胺反應(yīng)得到一系列化合物。其中化合物B6和B7的合成過(guò)程不同，通過(guò)將5-氯甲基-8羥基喹啉改變成5-胺甲基-8羥基喹啉，然后和4-三氟甲基苯甲酰氯

2、、4-三氟甲基苯磺酰氯反應(yīng)得到目標(biāo)化合物B6和B7。純化后通過(guò)核磁共振波譜(nuclear magnetic resonance，NMR)掃描鑒定其結(jié)構(gòu)，通過(guò)高效液相色譜(high-performance-liquid chromatography，HPLC)檢測(cè)其純度，控制純度＞95％。用于初步藥理研究的化合物A6并通過(guò)紅外光譜(infrared spectra，IR)掃描、紫外光譜掃描(utlraviolet，UV)，液相-串聯(lián)質(zhì)譜

3、(liquid chromatograph-mass spectrometer，LC-MS)進(jìn)一步鑒定化合物的結(jié)構(gòu)，并通過(guò)高效液相色譜儀檢測(cè)化合物的純度，控制純度＞99％。
　　結(jié)果：合成化合物通過(guò)HPLC測(cè)試純度均大于95％，并通過(guò)NMR掃描鑒定結(jié)構(gòu)的正確性。通過(guò)UV掃描、IR掃描、LC-MS測(cè)試進(jìn)一步驗(yàn)證化合物A6結(jié)構(gòu)正確，并通過(guò)HPLC測(cè)試純度為99.05％。
　　結(jié)論：合成設(shè)計(jì)思路正確，合成的硝羥喹啉衍生物純度合格，

4、可以用于藥理活性初篩實(shí)驗(yàn)。
　　第二部分硝羥喹啉衍生物的活性初篩及化合物A6的初步藥理活性研究。
　　目的：將合成的衍生物進(jìn)行活性初篩，篩選出活性較好的化合物A6;在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對(duì)化合物A6進(jìn)行初步的藥理活性研究。
　　方法：通過(guò)[3H]-thymidine摻入法實(shí)驗(yàn)考察已合成硝羥喹啉衍生物對(duì)HUVEC增殖能力的影響，篩選活性較好化合物，并根據(jù)篩選結(jié)果選擇化合物A6進(jìn)行初步的藥理活性研究。常規(guī)培養(yǎng)HUVEC細(xì)胞，采

5、用MTT實(shí)驗(yàn)考察化合物A6對(duì)細(xì)胞活力的抑制作用。設(shè)定Control組(DMSO，20μmol/L)、Nitroxoline組(Nitroxoline5μmol/L)、低劑量組(2.5μmol/L)、中劑量組(5μmol/L)和高劑量組(10μmol/L)5個(gè)組別進(jìn)行研究。給予處理培養(yǎng)24h后，光鏡下觀察化合物A6對(duì)HUVEC形態(tài)的影響;采用DAPI染色法觀察給予化合物A6后HUVEC細(xì)胞核的變化情況;Annexin V/PI雙染法考察化

6、合物A6誘導(dǎo)HUVEC凋亡的作用;Western blot法檢測(cè)HUVEC內(nèi)caspase-3/cleaved caspase-3的蛋白表達(dá)情況;Brdu增殖試劑盒測(cè)試化合物A6對(duì)HUVEC增殖能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1.[3H]-thymidine摻入法實(shí)驗(yàn)進(jìn)行活性初篩
　　[3H]-thymidine摻入法實(shí)驗(yàn)篩選的第一批化合物中化合物A6活性較好，對(duì)HUVEC細(xì)胞24h的IC50值為1.70μmol/L;第

7、二批化合物中化合物B5、B9、B4、B10活性較好，其24 h的IC50值分別為0.679μmol/L、0.644μmol/L、1.03μmol/L、1.51μmol/L。
　　2.不同處理后，HUVEC細(xì)胞形態(tài)的變化
　　Control組單個(gè)細(xì)胞形態(tài)正常，輪廓清晰，多個(gè)細(xì)胞呈現(xiàn)“鋪路石”狀排列，中、高劑量組和Nitroxoline組細(xì)胞有部分變圓、浮起、細(xì)胞間接觸變松。
　　3.不同處理后，DAPI染色觀察HUVEC

8、細(xì)胞核的變化
　　Control組細(xì)胞核染色質(zhì)均勻，核形完整;中、高劑量組和Nittoxoline細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)出現(xiàn)不同程度的凝集，核形不完整，核內(nèi)出現(xiàn)高亮的顆粒物質(zhì)。
　　4.不同處理后，Annexin V/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)考察HUVEC凋亡情況
　　與Control組相比，中、高劑量組凋亡率明顯提高（P＜0.01）;與Nitroxoline組相比，高劑量組凋亡率明顯提高(P＜0.05)。
　　5.不同處理

9、后，Western blot法檢測(cè)HUVEC內(nèi)caspase-3/cleaved caspase-3蛋白表達(dá)情況
　　與Control組相比，高劑量組caspase-3的蛋白表達(dá)量顯著降低(P＜0.05)，中、高劑量組cleaved caspase-3的蛋白表達(dá)量顯著升高(P＜0.05; P＜0.01)，且中、高劑量組與Nitroxoline組比較，cleaved caspase-3的蛋白表達(dá)含量顯著增高(P＜0.05;P＜0.0