重組辛德畢斯病毒的制備及其功能特性的研究.pdf

1、辛德畢斯(Sindbis virus，SINV)病毒隸屬于披膜病毒科(Togavirudea)甲病毒屬(Alphavirus)，感染人類可引發(fā)發(fā)熱、倦怠、頭痛、關(guān)節(jié)痛和皮疹等癥狀，被稱為“辛德畢斯綜合熱”。SINV在形態(tài)、結(jié)構(gòu)、復(fù)制、翻譯及發(fā)病機(jī)理等方面均集中體現(xiàn)了動(dòng)物病毒的特征，并且其為溫和型病原體，操作安全性高，目前已作為模型病毒被廣泛應(yīng)用于動(dòng)物病毒基本規(guī)律的研究。SINV在感染BHK、Vero等哺乳動(dòng)物細(xì)胞的同時(shí)，也可以感染C6/

2、36等昆蟲細(xì)胞，但該病毒在活體動(dòng)物的感染路徑和組織嗜性并不清楚，進(jìn)一步探討其感染的分子機(jī)制有賴于可視化重組病毒的制備。腦內(nèi)接種SINV可致3日齡乳鼠死亡，而高日齡小鼠在接種SINV后可自愈。近期研究表明，經(jīng)過傳代培養(yǎng)或定點(diǎn)突變后的篩選病毒可使高日齡小鼠死亡。但是SINV神經(jīng)毒力株特異性的分子機(jī)理還有待于進(jìn)一步研究。
　　 XJ-160病毒是上世紀(jì)90年代從新疆采集的蚊蟲標(biāo)本分離到的一株SIN病毒。本課題組多年來針對(duì)其開展了一系列

3、工作，包括全基因組序列測定和分析，感染性克隆構(gòu)建等。為了進(jìn)一步探討辛德畢斯病毒的組織嗜性，本研究擬以XJ-160病毒感染性克隆為分子基礎(chǔ)，通過融合PCR、體外轉(zhuǎn)錄和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染等方法構(gòu)建新型增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)報(bào)告基因標(biāo)記的SINV，并利用標(biāo)記病毒進(jìn)行了細(xì)胞易感性研究。同時(shí)，為了探討決定SINV神經(jīng)毒力日齡依賴性的分子機(jī)制，本研究還將通過體外定點(diǎn)突變等方法對(duì)其E2基因上的關(guān)鍵毒力位點(diǎn)進(jìn)行突變，并考察E2基因定點(diǎn)突變SINV的神經(jīng)

4、毒力特征。
　　 研究結(jié)果表明，利用XJ-160病毒反向遺傳學(xué)技術(shù)平臺(tái)，最終恢復(fù)獲得了EGFP標(biāo)記的SINV和4株突變病毒?；謴?fù)病毒的空斑形態(tài)和增殖趨勢均與親本病毒相似。利用標(biāo)記病毒進(jìn)行細(xì)胞嗜性研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SINV對(duì)腎癌細(xì)胞具有特異性侵染能力，為腎癌治療帶來了新的契機(jī)，對(duì)于開發(fā)相應(yīng)的腫瘤治療手段具有重要的指導(dǎo)意義。同時(shí)，乳鼠神經(jīng)毒力實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，E2基因上關(guān)鍵位點(diǎn)突變改變了XJ-160病毒致小鼠死亡的日齡，SINV致小鼠死亡的