脂肪干細胞組織工程軟骨修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨的初步實驗研究——人脂肪干細胞體外培養(yǎng)及向軟骨細胞誘導(dǎo)分化的實驗研究.pdf

1、目的：觀察人脂肪基質(zhì)干細胞（adipose derived stem cells，ADSCs）體外分離培養(yǎng)及成脂、成軟骨誘導(dǎo)分化的生物學(xué)性狀，探討其作為軟骨組織工程種子細胞的可行性。　　 方法： ①人脂肪組織來源于健康成年女性腹部吸脂術(shù)，酶消化法分離出ADSCs，體外培養(yǎng)擴增。 ②取第3代ADSCs，測細胞生長曲線，流式細胞儀測原代細胞表面標記；成脂和成軟骨誘導(dǎo)分化。 ③倒置顯微鏡觀察，油紅“O”、AB-

2、PAS（阿爾辛藍-過碘酸）染色和Ⅱ型膠原免疫熒光染色檢測分化情況：逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈式反應(yīng)（RT-PCR）檢測相關(guān)標志基因表達?！　?結(jié)果： ①體外培養(yǎng)的ADSCs細胞形態(tài)均一，傳代穩(wěn)定。 ②經(jīng)成脂誘導(dǎo)，細胞內(nèi)出現(xiàn)空泡，油紅“O”染色呈紅色，RT-PCR檢測到有Leptin、PPAR-γ表達：經(jīng)成軟骨導(dǎo)，AB-PAS染色呈紫紅色，Ⅱ型膠原免疫熒光染色胞漿呈強陽性，RT-PCR檢測COLLⅡ、SOX9、aggreca