ΙκΒα-,32-36A-基因抑制NF-κB對白血病細胞抗凋亡基因表達及化療敏感性影響的實驗研究.pdf

1、華中科技大學同濟醫(yī)學院博士學位論文ΙκΒα基因抑制NFκB對白血病細胞抗凋亡基因表達及化療敏感性影響的實驗研究姓名：曹文靜申請學位級別：博士專業(yè)：血液內科指導教師：張瑤珍2001.4.1華中科或丈學周濟犀學魔博士掌芷糟發(fā)源性IxBd條帶的前方。提示：IxBd。。n基因成功導入HL一60細胞并建立了IKBa：：m一穩(wěn)定高表達的細胞株HL一60I。廣一2、抑制NF—KB活化對化療藥誘導HL一60細胞基因表達及凋亡的影響；，『為了觀察化療藥物

2、是否能誘導NF—KB的活化，不同濃度的TNF～Q、柔紅霉素(DNR)和足葉乙甙(VP16)作用于HL一60細胞和HL一601細胞4h，間接免疫熒光染色顯示，NFKB中的RelA亞基在靜止的HL一60細胞表達于胞漿，而在藥物作用后易位至胞核。凝膠遷移率變動試驗結果表明，TNFQ、DNR和vP—16呈劑量依賴性誘導HL一60細胞NF—KB的核轉位激活，VP—16激活NF—KB的最小濃度為1ug／ml。在親代細胞，誘導NF—KB的DNA結合活

3、性非常強，而在穩(wěn)定表達IKBⅡ。。。蛋白的HL60I細胞中，NF—KB的DNA結合活性被明顯抑制。IKBⅡ。。。幾乎可以完全抑制lOng／mlTNF—Q、1uMDNR和10ug／mlVP一16誘導的NF—KB活化。非標記探針的競爭結合實驗證實了NF—KB激活的特異性。與NF—KB活化對應的是內源性IKBn的降解。上述結果提示：NF—KB是化療誘導性轉錄因子，在體外有效作用濃度范圍內，NF—KB激活呈劑量依賴性，而IKBa。，?？梢杂行б?/p>

4、制NF—KB的誘導激活。為進一步探討NF—KB活化過程中活性氧中間產物(reactionoxygenintermediates，ROI)所起的作用，采用EMSA觀察抗氧化劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(Pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC)對DNR、VP一16誘導的NF—KB活性的影響。結果表明，PDTC以劑量依賴方式抑制DNR和VP一16誘導的NF—KB活化a1001JM的PDTC能完全抑制NF—KB的活化。結果提