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文檔簡介
1、目的:以增強型綠色熒光蛋白(EGFP)作為陽性對照,使腫瘤壞死因子受體1的抗體融合蛋白(TNFR1-IgG4)在中華倉鼠卵巢(CHO)細胞中高效表達,為TNFRl-IgG4的功能研究和臨床應用奠定基礎。 方法:分別以NheI和XbaI單酶切和NheI和XbaI雙酶切進行pMM-TNFRl-IgG4/WG和pMM-EGFP-IgG4/WG鑒定。用Not I對質粒pMM-TNFR1-IgG4/WG和pMM-EGFP-IgG4/WG線
2、性化,用Nde I對質粒pMMGR線性化。用脂質體轉染法分別將以上質粒轉染至CHO細胞中,經G418、透析血清篩選后得到克隆,MTX加壓后進行無血清培養(yǎng),用熒光顯微鏡觀察,SDS-PACE 和WesternBlot檢測它們在CHO細胞中的表達情況。 結果:將真核表達載體pMM-TNFR1-IgG4/WG、pMM-EGFP-IgG4/WG和pMMGR順利轉染至CHO細胞中,EGFP陽性克隆在熒光顯微鏡下均呈綠色,用Protein-
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