NHE1在白血病血管生成及間充質(zhì)分化中的作用.pdf

1、第一部分
　　 背景:鈉氫交換蛋白1(NHE1)是鈉氫交換蛋白家族中廣泛表達的一員，可以催化細胞內(nèi)的質(zhì)子與細胞外的鈉離子進行交換，因此可以調(diào)節(jié)細胞內(nèi)pH。細胞內(nèi)pH增高與腫瘤的很多病理狀態(tài)直接相關(guān)，比如生長因子和癌基因活性，DNA合成，細胞轉(zhuǎn)化和增殖，遷移以及多藥耐藥。然而，NHE1與白血病血管生成的關(guān)系迄今并沒有得到確認(rèn)。本研究中，我們研究抑制NHE1后白血病血管生成的變化，并探討其可能機制。
　　 方法:應(yīng)用NHE1

2、特異性抑制劑Cariporide處理K562細胞;用激光共聚焦顯微鏡測定K562細胞內(nèi)的pH;采用MTT測定Cariporide處理對細胞活性的影響;ELISA和westernblotting檢測K562上清中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達水平;應(yīng)用MTT檢測K562上清對臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)增殖能力的影響;應(yīng)用transwell檢測K562上清對HUVEC遷移能力的影響;matrigel檢測HUVEC的體外血管形成能力;皮下

3、腫瘤移植及免疫組化檢測K562移植腫瘤的生長及血管新生。
　　 結(jié)果:分別用不同濃度的Cariporide處理K562細胞后用MTT檢測細胞的活力，Cariporide在小于40μM濃度條件下對細胞活力沒有明顯影響，因此以下實驗中Cariporide均采用10μM濃度，以排除Cariporide的生理毒性;Cariporide處理顯著降低K562的細胞內(nèi)pH; Cariporide處理可以顯著下調(diào)K562中VEGF的表達分泌;C

4、ariporide處理可以顯著降低K562上清對HUVEC增殖能力的誘導(dǎo)，補充VEGF到Cariporide處理的K562上清中使VEGF濃度與未處理的K562上清中VEGF的濃度相同，補充VEGF可以部分減弱這種抑制作用;transwell實驗證明Cariporide處理后K562對HUVEC遷移能力的誘導(dǎo)也受到抑制，在補充VEGF后這種抑制作用得到部分恢復(fù);Cariporide處理后K562上清對HUVEC成管能力的誘導(dǎo)也得到抑制，

5、補充VEGF后這種抑制作用得到部分恢復(fù);Cariporide處理后腫瘤的血管密度顯著減少并且腫瘤的生長速度和體積均較對照組顯著減少。
　　 結(jié)論:研究證明采用Cariporide特異性抑制NHE1可以下調(diào)K562的細胞內(nèi)pH，降低K562細胞VEGF的表達分泌，通過降低對內(nèi)皮細胞的誘導(dǎo)作用抑制白血病的血管新生從而抑制腫瘤生長，NHE1是白血病治療的一個潛在的靶點。
　　 第二部分
　　 背景:鈉氫交換蛋白1(NH

6、E1)是鈉氫交換蛋白家族中廣泛表達的一員，可以催化細胞內(nèi)的質(zhì)子與細胞外的鈉離子進行交換，因此可以調(diào)節(jié)細胞內(nèi)pH。高的細胞內(nèi)pH對于維持細胞的增殖和分化具有重要的作用。我們之前的研究已經(jīng)證明間充質(zhì)細胞的細胞內(nèi)pH比正常分化的細胞高，與腫瘤細胞的pH接近，抑制NHE1可以促進K562白血病細胞的分化，因此我們推測是否抑制NHE1可以促進間充質(zhì)細胞的分化。
　　 目的:研究抑制NHE1是否可以促進間充質(zhì)分化，并研究其可能的信號通路。<

7、br>　　 方法:從人臍帶中獲取MSC，并對MSC做出鑒定，包括流式細胞儀檢測細胞表型和分化。應(yīng)用特異的NHE1的抑制劑Cariporide處理MSC，觀察其與未處理的MSC的分化的差異，并研究可能影響的信號通路。
　　 結(jié)果:Cariporide處理后MSC的成骨分化能力顯著提高，成脂分化能力未見顯著差異。Cariporide處理可能通過上調(diào)β-catenin表達來促進MSC成骨分化。
　　 結(jié)論:Cariporid