駑巴貝斯蟲BC-48基因片段在大腸桿菌中的表達(dá)與初步應(yīng)用.pdf

1、駑巴貝斯蟲(Babesia caballi)是一種經(jīng)蜱傳播的血液原蟲，可引起馬屬動物發(fā)熱、貧血、黃疸和水腫，嚴(yán)重的可致死。該病被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為B類疫病，給養(yǎng)馬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。駑巴貝斯蟲管狀蛋白主要起到侵入紅細(xì)胞的作用，是抗駑巴貝斯蟲裂殖子疫苗的候補蛋白。BC-48基因編碼駑巴貝斯蟲裂殖子管狀蛋白，而且是該蟲屬比較重要的保守基因。 本研究利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和克隆了610 bp駑巴貝斯蟲中國吉林株BC-48基

2、因片段，對所克隆的BC一48基因序列與基因庫中已發(fā)表的序列(U46551)進(jìn)行比較分析。結(jié)果表明同源性達(dá)到97.1％，證明了該基因片段為駑巴貝斯蟲BC-48基因。將BC-48基因克隆至原核表達(dá)載體pGEX-4T-2，經(jīng)酶切鑒定及PCR鑒定，證明成功構(gòu)建了融合表達(dá)載體pGEX-BC48。將構(gòu)建好的融合表達(dá)載體，在1mmol/L的IPTG誘導(dǎo)下，在大腸桿菌BL21中得到大量表達(dá)，經(jīng)過8 h表達(dá)量達(dá)到高峰。融合蛋白GST-BC48的分子量為4

3、5 ku，大部分以可溶性蛋白的形式存在。用親和層析方法對GST-BC48融合蛋白進(jìn)行了純化，獲得了理想的純化結(jié)果。 Western-bloting免疫印記分析，融合蛋白與駑巴貝斯蟲陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng)，而同馬巴貝斯蟲陽性血清沒有交叉反應(yīng)。說明該蛋白具有很好的抗原性和特異性。 本研究應(yīng)用純化后的GST-BC48融合蛋白建立了檢測駑巴貝斯蟲抗體的間接ELISA方法。結(jié)果表明，抗原濃度為2.5μg/mL、被檢血清稀釋度為1：