骨髓間充質(zhì)干細胞早期移植干預(yù)角膜堿燒傷的實驗研究.pdf

1、目的：研究早期結(jié)膜下或角膜基質(zhì)內(nèi)移植小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（b o ne marrow mesenchymal stem cells，BM-MSCs）干預(yù)角膜堿燒傷的可行性，并探討其可能的作用機制。
　　方法：（1）培養(yǎng)綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）轉(zhuǎn)基因C57BL/6小鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞（mMSCs-GFP），證明其活性，可擴增傳代，并對其表面標志和多向分化潛能進行鑒定。（2）選擇與m

2、MSCs-GFP同源的EGFP-C57BL/6陰性小鼠建立角膜堿燒傷模型。將mMS C s-GFP移植到堿燒傷模型左眼的結(jié)膜下和角膜基質(zhì)內(nèi)，同時右眼作為對照組（移植 P BS或不干預(yù)）。分別于移植后3天、7天、14天和28天觀察角膜透明度、角膜新生血管和角膜上皮愈合情況，明確mMS C s-GFP在角膜內(nèi)的存活、遷移和分化情況。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA）檢測炎

3、癥相關(guān)因子白介素6（Interleukin6，IL-6）和白介素10（Interleukin10，IL-10）的變化情況，應(yīng)用實時熒光定量 PCR（Realtime-PCR）法檢測小鼠角膜血管生成相關(guān)因子血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF)和色素上皮衍生因子（pigment epithelium-derived factor，PEDF) mRNA表達水平變化情況。
　　

4、結(jié)果：(1)體外培養(yǎng)的mMS Cs-GFP生長旺盛，增殖速度快，表達Sc a-1、C D29和 C D73，而不表達造血干細胞表面標志 C D34、C D45。mMSCs-GFP具有向脂肪、成骨和成軟骨細胞的分化潛能。（2）結(jié)膜下移植 mMS Cs-GFP可改善小鼠角膜堿燒傷模型眼的角膜混濁程度，抑制新生血管的生成并且加速角膜上皮的修復(fù)，增加了可溶性抗炎癥因子IL-6、IL-10的分泌，下調(diào)血管新生因子VEGF，上調(diào)抗血管新生因子 PE

5、DF的表達水平，與對照組比較都存在顯著差異（P<0.05）。mMS C s-GFP沒有遷移至角膜組織內(nèi)，也沒有分化為角膜上皮樣細胞。（3）角膜基質(zhì)內(nèi)移植mMSCs-GFP沒有改善角膜堿燒傷模型眼的角膜混濁程度、角膜新生血管和角膜上皮的修復(fù)速度，也沒有影響角膜組織內(nèi)IL-6、IL-10、VEGF和PEDF的表達水平，其原因可能是因為移植的mMSCs-GFP沒有在同種異體的角膜組織內(nèi)存活并發(fā)揮功能。
　　結(jié)論：我們的實驗研究了mMSC