弓形蟲感染與NLRP3炎癥小體相關(guān)性的初步研究.pdf

1、目的：
　　弓形蟲是一種在世界范圍廣泛傳播的機(jī)會(huì)致病寄生蟲。世界上約有1/3的人血清試驗(yàn)呈陽(yáng)性,但是大多數(shù)人表現(xiàn)為沒(méi)有顯著臨床癥狀的隱性感染。對(duì)孕產(chǎn)婦則為顯性感染,主要表現(xiàn)有流產(chǎn),死胎,先天畸形等,其致病機(jī)制尚不清楚。本研究旨在闡述弓形蟲感染后宿主固有免疫變化與弓形蟲致病間的關(guān)系,選取弓形蟲感染后NLRP3炎癥小體為研究對(duì)象,探討弓形蟲感染后NLRP3炎癥小體活性及其激活機(jī)制,為弓形蟲病治療提供新的策略。
　　方法：

2、　　1.弓形蟲感染與NLRP3激活的相關(guān)性研究:弓形蟲速殖子以1︰2(速殖子︰細(xì)胞)的比例感染THP-1細(xì)胞,對(duì)照組加入與速殖子等體積的PBS緩沖液。半定量PCR分析THP-1細(xì)胞中NLRP3和caspase-1mRNA的變化。Westernblot分析THP-1細(xì)胞中NLRP3和caspase-1蛋白的變化。ELISA分析THP-1細(xì)胞上清中白介素1β(IL-1β)和IL-18的變化。將昆明鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組腹腔注射2×

3、107弓形蟲速殖子,對(duì)照組注射等體積的PBS緩沖液。半定量PCR分析小鼠脾臟中NLRP3和caspase-1mRNA的變化。ELISA分析小鼠外周血血清中IL-1β和IL-18的變化。
　　2.弓形蟲感染激活NLRP3炎癥小體可能機(jī)制:弓形蟲速殖子以1︰2(速殖子︰細(xì)胞)的比例感染對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組THP-1細(xì)胞,空白組不感染弓形蟲速殖子,實(shí)驗(yàn)組分別加入K+70Mm/孔、N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)25Mm/孔和CA-074Me

4、10μm/孔。ELISA分析THP-1細(xì)胞上清中IL-1β和IL-18的變化。
　　結(jié)果：
　　1.弓形蟲感染與NLRP3激活的相關(guān)性研究:弓形蟲感染THP-1細(xì)胞后NLRP3、caspase-1mRNA和蛋白表達(dá)水平增高,IL-1β、IL-18含量升高。弓形蟲感染小鼠的脾臟中NLRP3、caspase-1mRNA同樣增高,其外周血血清中IL-1β、IL-18含量升高。
　　2.弓形蟲感染激活NLRP3炎癥小體的可能機(jī)

5、制:加入K+后實(shí)驗(yàn)組IL-1β和IL-18含量與空白組比較升高,但與對(duì)照組比較無(wú)顯著變化,說(shuō)明其活化可能與K+外排無(wú)關(guān)。加入NAC后實(shí)驗(yàn)組IL-1β和IL-18含量與空白組比較顯著降低,與對(duì)照組比較也顯著降低,說(shuō)明其活化可能與活性氧(reactive oxygen species,ROS)有關(guān)。加入CA-074Me后實(shí)驗(yàn)組IL-1β和IL-18含量與空白組比較升高,但與對(duì)照組比較無(wú)顯著變化,說(shuō)明其活化可能與組織蛋白酶無(wú)關(guān)。
　　結(jié)