人卵巢癌Skov3多細(xì)胞團(tuán)簇耐藥和轉(zhuǎn)移共同相關(guān)基因的篩查黏附分子與Skov3多細(xì)胞團(tuán)簇耐藥、轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究.pdf

1、第一部分: 人卵巢癌Skov3多細(xì)胞團(tuán)簇裸鼠腹腔轉(zhuǎn)移瘤模型的建立 目的：復(fù)制人卵巢癌Skov3多細(xì)胞團(tuán)簇(MCAs)裸鼠腹腔移植瘤模型，為研究卵巢癌多細(xì)胞耐藥和轉(zhuǎn)移機(jī)制提供技術(shù)平臺(tái)。方法：用液體重疊培養(yǎng)系統(tǒng)獲得卵巢癌Skov3 MCAs，將細(xì)胞團(tuán)簇懸液注射裸鼠腹腔，動(dòng)態(tài)觀察裸鼠腹腔情況、成瘤率。H-E染色觀察移植瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征。結(jié)果：Skov3 MCAs注射小鼠腹腔后3周，裸鼠成瘤率為100％。移植瘤細(xì)胞形態(tài)保持了原有

2、細(xì)胞的特征。移植瘤生長特性、轉(zhuǎn)移方式及腹水形成等與人卵巢癌臨床特征相似。結(jié)論：本成功復(fù)制人卵巢癌Skov3 MCAs小鼠腹腔移植瘤模型，該模型模擬了人卵巢癌腹腔播散的生物學(xué)行為特征，為研究卵巢癌MCAs轉(zhuǎn)移和耐藥提供了技術(shù)平臺(tái)； 第二部分: 基因芯片技術(shù)和SSH技術(shù)篩查Skov3多細(xì)胞團(tuán)簇耐藥和轉(zhuǎn)移的共同 差異基因 目的：以cDNA基因芯片篩查卵巢癌Skov3多細(xì)胞團(tuán)簇耐藥和轉(zhuǎn)移的共同關(guān)鍵調(diào)節(jié)基因和相應(yīng)調(diào)節(jié)靶點(diǎn)：

3、從基因轉(zhuǎn)錄水平分析它們之間的調(diào)控關(guān)系；以SSH技術(shù)試圖發(fā)現(xiàn)新的功能基因，進(jìn)一步從基因轉(zhuǎn)錄水平探索卵巢癌耐藥和轉(zhuǎn)移關(guān)系。方法：以Affymetrix u133A2.0基因表達(dá)譜芯片篩選Skov3單細(xì)胞(A)、MCAs(B)以及MCAs裸鼠腹腔轉(zhuǎn)移瘤(C)cDNA，獲取A vs B組與B vs C組變化趨勢相同基因；SSH：分別獲取標(biāo)本A、B、C雙鏈cDNA，Rsal酶切，兩輪消減雜交后進(jìn)行兩次套式PCR擴(kuò)增，使用斑點(diǎn)雜交技術(shù)對(duì)差異表達(dá)基因

4、進(jìn)行驗(yàn)證。組間比值大于2或小于0.5者，為存在表達(dá)差異。 結(jié)果：53個(gè)基因在A vs B組與B vs C組顯示相同的變化趨勢，即均為表達(dá)升高或均為表達(dá)下降。37個(gè)基因表達(dá)升高，多為細(xì)胞粘附、蛋白水解、細(xì)胞周期調(diào)控等功能有關(guān)的基因；16個(gè)基因表達(dá)下調(diào)，多與代謝、細(xì)胞分化、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)等功能有關(guān)；SSH法獲得19條差異表達(dá)片斷，A／B組有7條，6條在A組細(xì)胞表達(dá)增高，1條在B組表達(dá)增高；B／C組12條，均在B組表達(dá)增高。其中5條為

5、線粒體基因片斷，6條為基因組DNA序列，除了其中g(shù)i|21304291中含有基因KLF4、參與負(fù)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞增值以及中胚層細(xì)胞分化調(diào)節(jié)外，其他的5條僅含STS、repeat等結(jié)構(gòu)，功能不明；其他8條多與蛋白折疊、分選、代謝等功能有關(guān)； 結(jié)論：卵巢癌MCAs耐藥和轉(zhuǎn)移之間可能有共同的關(guān)鍵調(diào)節(jié)基因、相應(yīng)調(diào)節(jié)靶點(diǎn)和有相同的調(diào)節(jié)機(jī)制。細(xì)胞粘附、蛋白水解、細(xì)胞周期調(diào)控等功能相關(guān)基因的上調(diào)，細(xì)胞代謝、細(xì)胞分化、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)等功能相關(guān)基因