抗人前列腺癌PSA抗體-SPIO及抗人前列腺癌HER-2-neu抗體-SPIO的制備及二者在PC-3和LNCaP細(xì)胞系中的應(yīng)用研究.pdf

1、目的：1.制備前列腺癌抗體造影劑抗PSA抗體-SPIO和抗HER-2/neu抗體-SPIO。利用電鏡檢測其粒徑和形態(tài)，并測定兩種抗體與SPIO的結(jié)合率。 2.培養(yǎng)前列腺癌LNCaP 細(xì)胞和PC-3 細(xì)胞，并用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測兩細(xì)胞PSA 和HER-2/neu 的表達(dá)。 3.利用電鏡、流式細(xì)胞儀、磁共振分析抗體造影劑對LNCaP 細(xì)胞和PC-3 細(xì)胞的靶向效果。 方法： １.采用化學(xué)交聯(lián)法制備兩種抗體造

2、影劑抗PSA 抗體-SPIO 和HER-2/neu 抗體-SPIO。利用電鏡進(jìn)行檢測，同時(shí)Folin-酚法檢測抗體與SPIO 的結(jié)合率。 2. 培養(yǎng)人前列腺癌LNCaP 細(xì)胞和PC-3 細(xì)胞；免疫細(xì)胞化學(xué)（SP法）分別檢測兩細(xì)胞PSA 和HER-2/neu 的表達(dá)。 3. 采用流式細(xì)胞術(shù)對樣品（抗PSA 抗體、抗HER-2/neu 抗體、抗PSA 抗體-SPIO、抗HER-2/neu 抗體-SPIO）和兩細(xì)胞（LNCaP

3、 細(xì)胞和PC-3 細(xì)胞）的結(jié)合進(jìn)行測試，測定McAb-SPIO 的抗體活性。 4.利用電鏡檢測McAb-SPIO 進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的情況和活性，利用MR檢測兩McAb-SPIO 對細(xì)胞的靶向增強(qiáng)作用。 結(jié)果： 1.經(jīng)電鏡觀察和洗脫液的蛋白含量測定，得到抗體與SPIO 有效的結(jié)合在一起，抗PSA 抗體與SPIO 交聯(lián)率為96.5％ ，抗HER-2/neu抗體與SPIO 95.7％。經(jīng)電鏡觀察靶向造影劑粒徑在50-100n

4、m 之間。 2.免疫細(xì)胞化學(xué)檢測LNCaP 細(xì)胞PSA 表達(dá)呈陽性，HER-2/neu表達(dá)為陰性。PC-3 細(xì)胞HER-2/neu 表達(dá)呈陽性，PSA 表達(dá)為陰性。 3.流式細(xì)胞術(shù)檢測LNCaP 與抗PSA 抗體-SPIO 以及抗PSA 抗體結(jié)合率高，PC-3 與抗HER-2/neu 抗體-SPIO 及抗HER-2/neu 抗體結(jié)合率高。 4.電鏡檢查LNCaP 細(xì)胞中加抗PSA 抗體-SPIO 細(xì)胞漿內(nèi)鐵粒子量

5、明顯高于其他兩組；PC-3 細(xì)胞中加抗HER-2/neu 抗體-SPIO 組胞漿內(nèi)鐵粒子量明顯高于其他。 5.MR檢查LNCaP細(xì)胞中加抗PSA抗體-SPIO組和PC-3細(xì)胞中加抗HER-2/neu抗體-SPIO組T2WI信號(hào)明顯降低。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了靶向前列腺癌LNCaP 細(xì)胞PSA 的探針抗PSA 抗體-SPIO 和靶向PC-3 細(xì)胞HER-2/neu 的探針抗HER-2/neu 抗體-SPIO，均具有良好的