小鼠sIL-13Rα2的原核表達(dá)、純化與鑒定.pdf

1、哮喘是多種細(xì)胞參與的慢性氣道過敏性炎癥。Th2型細(xì)胞因子IL-13在炎癥反應(yīng)過程中起關(guān)鍵作用。它可引起多種哮喘病理學(xué)變化,包括氣道高反應(yīng)性、肺部Eos增多、粘液分泌增加、IgE合成增多以及纖維化。在小鼠哮喘模型中,IL-13Rα2-Fc或抗IL-13單抗可有效抑制以上哮喘病理變化。一些抗IL-13單抗正處于臨床前期試驗階段,最終臨床效果尚待證實,但大量臨床前試驗數(shù)據(jù)顯示IL-13阻斷劑有望成為治療哮喘的新藥物。IL-13Rα2是個誘餌受

2、體,可以阻斷IL-13與IL-13Rα1/IL-4Rα結(jié)合,從而阻斷IL-13的生物活性。可溶性IL-13Rα2(sIL-13Rα2)可有效拮抗其細(xì)胞因子,無單抗的異種免疫源性,對機(jī)體刺激反應(yīng)小。目前未見sIL-13Rα2治療哮喘的研究。國外研究人員已經(jīng)在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中成功表達(dá)了重組狗IL-13Rα2-Fc(rcaIL-13Rα2-Fc)和重組狗IL-13Rα2(rcaIL-13Rα2)。本研究擬利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)sIL-13

3、Rα2,為研究其治療哮喘奠定基礎(chǔ)。
　　目的:在大腸桿菌中表達(dá)具有生物學(xué)活性的sIL-13Rα2。
　　方法:將sIL-13Rα2基因克隆入原核表達(dá)載體pProEx HTa,構(gòu)建重組表達(dá)載體pProEx HTa/ sIL-13Rα2,經(jīng)酶切及DNA測序后,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá),鎳柱親和層析法純化目的蛋白,A-549生物鑒定法測定純化sIL-13Rα2的生物活性。SDS-PAGE分析表達(dá)產(chǎn)物,灰度掃

4、描測量表達(dá)產(chǎn)物含量,超聲破菌分析其可溶性,以Western-blot初步鑒定表達(dá)產(chǎn)物。
　　結(jié)果:成功構(gòu)建了pProEx HTa/sIL-13Rα2原核表達(dá)載體,并在大腸桿菌中表達(dá)出sIL-13Rα2,約占菌體總蛋白的45％。超聲裂菌分析表達(dá)產(chǎn)物表明其以包涵體形式存在,并且可與抗小鼠sIL-13Rα2單抗發(fā)生特異性反應(yīng)。SDS-PAGE分析純化后sIL-13Rα2純度大于95％。A-549生物鑒定表明sIL-13Rα2具有抑制IL