小鼠sIL-13Rα2基因克隆及在畢赤酵母菌中的表達.pdf

1、哮喘發(fā)病率不斷升高，近十年西歐哮喘發(fā)病率增長了近一倍，約15％的成人患哮喘，而5％的患者控制較差，臨床急需針對哮喘氣道炎癥的新方法[1]。研究哮喘動物模型表明IL-13在誘發(fā)氣道高反應能性（airwayhyperreactivityAHR）中起重要作用，阻斷IL-13及其通路從而促進哮喘的治療?？扇苄訧L-13受體（sIL-13Rα2）是免疫炎癥中重要的調節(jié)者，它能下調或者增強IL-13信號通路和因子反應?？扇苄匀诤系鞍譻IL-13Rα

2、2可在體液中與IL-13結合，從而限制IL-13與其細胞膜受體的結合，抑制其作用并減少單克隆抗體治療的變應原性。目前用sIL-13Rα2靶向治療哮喘小鼠國內外還未見報道。本研究用分子克隆技術克隆小鼠sIL-13Rα2基因，并構建酵母表達載體，轉染酵母表達系統(tǒng)表達sIL-13Rα2蛋白，為哮喘治療奠定基礎。
　　目的：克隆小鼠sIL-13Rα2基因并構建酵母表達載體，轉染畢赤酵母GS115菌株中進行sIL-13Rα2蛋白的表達。

3、r>　　方法：從小鼠脾臟細胞中提取總RNA，逆轉錄為cDNA，應用分段PCR的方法克隆小鼠sIL-13Rα2基因，目的基因經(jīng)鑒定后定向克隆至酵母表達質粒pPICZα-A，并轉染畢赤酵母GS115菌株，加入酵母培養(yǎng)基和誘導劑進行進行目的蛋白的誘導表達。利用SDS-PAGE和Western分析目的蛋白表達的結果。
　　結果：RT-PCR方法克隆出933bp大小的可溶性IL-13Rα2目的基因片段，測序結果與genbank登陸的基因大小

4、相一致，目的基因成功連接至pPICZα-A/sIL-13Rα2酵母表達載體，并成功轉染至畢氏酵母菌，誘導表達出可溶性IL-13Rα2目的蛋白。目的蛋白經(jīng)SDS-PAGE和Western分析大小為36.2kD，與protein文庫相一致。
　　結論：已成功克隆和構建出小鼠sIL-13Rα2目的基因及酵母表達載體，并利用畢赤酵母表達系統(tǒng)表達出了小鼠可溶性IL-13Rα2目的蛋白，為應用sIL-13Rα2蛋白治療哮喘及其他過敏性疾病奠定