高糖、胰島素、糖基化終末產(chǎn)物對小鼠骨髓干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的影響.pdf

1、本研究分為二部分：第一部分、高糖對小鼠骨髓干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的影響及胰島素的保護(hù)作用。
　　 目的: 觀察不同濃度糖和胰島素對骨髓干細(xì)胞 (Bone marrow stem cells，BMSCs)向內(nèi)皮細(xì)胞分化能力的影響。
　　 方法：采用不同濃度糖（5.6mmol/L、16.7mmol/L、25mmol/L）和胰島素（0mU/L、15mU/L，、200mU/L）分組培養(yǎng)骨髓單個核細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測內(nèi)皮細(xì)胞表面

2、標(biāo)志Flk-1（VEGFR-2），激光共聚焦顯微鏡進(jìn)一步檢測并鑒定內(nèi)皮細(xì)胞。
　　 結(jié)果：在相同胰島素濃度下，隨著糖濃度升高，F(xiàn)LK-1陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)和百分?jǐn)?shù)均明顯降低，均有：在0mU/L胰島素影響下，16.7mmol/L 糖vs 5.6mmol/L糖，p<0.01；25mmol/L糖vs 5.6mmol/L糖，p<0.01；25mmol/L糖vs. 16.7mmol/L 糖，p<0.01；在15mU/L 胰島素和200mU/L胰

3、島素作用下，也呈現(xiàn)以上結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。在相同糖濃度影響時，隨著胰島素濃度升高，F(xiàn)LK-1陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)和百分?jǐn)?shù)均增加，均有：5.6mmol/L 糖下，15mU/L 胰島素vs 0mU/L胰島素，p<0.01；200mU/L胰島素vs 0mU/L胰島素，p<0.01；在16.7mmol/L糖和25mmol/L糖下，都有：15mU/L 胰島素vs 0mU/L胰島素，p<0.01；200mU/L胰島素vs 0mU/L胰島

4、素，p<0.01；200mU/L胰島素vs 15mU/L 胰島素，p>0.05。與0mU/L胰島素作用比較，15mU/L 胰島素和200mU/L胰島素都可以顯著提高FLK-1陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)和百分?jǐn)?shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)；而200mU/L胰島素較15mU/L 胰島素不能顯著提高FLK-1陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)和百分?jǐn)?shù)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。
　　 結(jié)論：高糖呈量效地抑制BMSCs向內(nèi)皮細(xì)胞的分化，胰島素可促進(jìn)BMSCs

5、向血管內(nèi)皮細(xì)胞的分化，并可改善高糖對BMSCs分化的抑制作用。
　　 第二部分、糖基化終末產(chǎn)物（AGE）對小鼠骨髓干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的影響。
　　 目的：觀察糖基化終末產(chǎn)物（advanced glycation end-products，AGEs）對骨髓干細(xì)胞 (Bone marrow stem cells,BMSCs)體外向內(nèi)皮細(xì)胞分化的能力的影響。
　　 方法：密度梯度離心法獲取骨髓單個核細(xì)胞，收集貼壁

6、細(xì)胞培養(yǎng)第8天加入預(yù)先孵育好的AGE，對照組加BSA，并干預(yù)一定時間（72h）。流式細(xì)胞儀檢測內(nèi)皮細(xì)胞表面標(biāo)志Flk-1（VEGFR-2），激光共聚焦顯微鏡進(jìn)一步檢測并鑒定內(nèi)皮細(xì)胞。對陽性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，觀察并比較不同條件下BMSCs分化為內(nèi)皮細(xì)胞的能力。
　　 結(jié)果：在100μg/mlAGE影響下，F(xiàn)LK-1陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)和百分?jǐn)?shù)均明顯降低，與對照組比較，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)；而20μg/mlAGE對FLK-1陽性細(xì)