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1、目的:探討體外非接觸共培養(yǎng)條件下兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stemcells,MSCs)雞尾酒效應(yīng)對(duì)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)過(guò)早衰老髓核細(xì)胞(nucleus pulposuscells,NPCs)的復(fù)蘇作用。
方法:體外分離、培養(yǎng)兔MSCs和NPCs,鑒定細(xì)胞表型。取P3代MSCs和原代NPCs非接觸共培養(yǎng),并分為:A組單純NPCs培養(yǎng),不行過(guò)早衰老誘導(dǎo);B組MSCs與NPCs細(xì)胞比例1:1共培養(yǎng);C組MSCs與NP
2、Cs細(xì)胞比例1:3共培養(yǎng);D組單純NPCs培養(yǎng),行過(guò)早衰老誘導(dǎo);B、C、D三組用50μmol/L雙氧水處理NPCs誘導(dǎo)其過(guò)早衰老。共培養(yǎng)后第3d、6d,通過(guò)SA-β-gal的細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)各組NPCs的細(xì)胞老化率,半定量RT-PCR檢測(cè)聚集蛋白聚糖Aggrecan及Ⅱ型膠原的相對(duì)轉(zhuǎn)錄水平。
結(jié)果:P3代MSCs高表達(dá)CD44,低表達(dá)CD34、CD45;NPCs于胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)Ⅱ型膠原和聚集蛋白多糖。共培養(yǎng)3d后,B組(7.6
3、2±0.04%)和C組(7.24±0.11%)NPCs的細(xì)胞老化率均已低于D組(11.3±0.48%),而高于A組(0.80±0.07%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);并隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),C組的細(xì)胞老化率開(kāi)始低于B組(P<0.05)。共培養(yǎng)后A組、B組和C組NPCs的Aggrecan、Ⅱ型膠原相對(duì)轉(zhuǎn)錄水平均高于D組,比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:在體外非接觸共培養(yǎng)體系下,MSCs可通過(guò)旁分泌的雞尾
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