差異性培養(yǎng)法誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成類髓核細(xì)胞的比較.pdf

1、目的：
　　1、證實(shí)TGF-β1和IGF-1單獨(dú)及聯(lián)合都能夠誘導(dǎo)BMSCs向類髓核細(xì)胞分化。
　　2、在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和髓核細(xì)胞體外非接觸共培養(yǎng)條件下，探討不同比例TGF-β1(轉(zhuǎn)化生長因子β1)和IGF-1(胰島素樣生長因子1)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向類髓核細(xì)胞轉(zhuǎn)化的作用。
　　方法：
　　應(yīng)用貼壁培養(yǎng)法體外分離、鑒定、培養(yǎng)、擴(kuò)增兔BMSCs和髓核細(xì)胞;將原代髓核細(xì)胞和第二代生長良好的BMSCs消化后制成細(xì)胞懸

2、液,然后在transwell培養(yǎng)板中共培養(yǎng),上層放BMSCs,下層放NPCs,分為不加入（對照組）,加入IGF-1（實(shí)驗(yàn)組1）、TGF-β1（實(shí)驗(yàn)組2）、IGF-1與 TGF-β1混合（比例分別為10:1,5:1,1:1,1:5,1:10,相對應(yīng)實(shí)驗(yàn)組4、5、6、7、8）誘導(dǎo);共培養(yǎng)5、10、15、20、25d后,分別觀察細(xì)胞形態(tài)變化,并利用RT-PCR（reverse transcription PCR）和Western blot檢測

3、其表達(dá)的蛋白聚糖和Ⅱ型膠原含量,以尋找最佳培養(yǎng)方式。
　　結(jié)果：
　　RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果,發(fā)現(xiàn)在8組實(shí)驗(yàn)中，第5、10、15天,蛋白聚糖和Ⅱ型膠原表達(dá)的相對含量都逐漸增加,組間比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而在第15、20、25天,二者相對含量變化不大,組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在相同的培養(yǎng)條件下，當(dāng)IGF-1/TGF-β1的比值1/5時(shí),蛋白聚糖和Ⅱ型膠原表達(dá)的相對含量達(dá)到最大,組間比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而

4、IGF-1/TGF-β1比值繼續(xù)增大時(shí),二者相對含量變化不大,組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1、BMSCs和NPCs共培養(yǎng)可以誘導(dǎo)BMSCs向NPs分化,并且共培養(yǎng)15天左右,蛋白聚糖和Ⅱ型膠原表達(dá)含量已達(dá)到最佳狀態(tài)。
　　2、TGF-β1和IGF-1單獨(dú)及聯(lián)合都能夠誘導(dǎo)BMSCs向NPs分化。
　　3、在定量的BMSCs和NPCs體外共培養(yǎng)條件下,IGF-1與TGF-β1比例為1:5時(shí)，經(jīng)誘導(dǎo)的骨髓間