腺病毒攜帶TNF-α-siRNA和BMP-2基因抑制小鼠假體骨溶解的研究.pdf

1、目的:通過攜帶有TNF-ɑ-siRNA(Tumornecrosisfactor-asmallinterferingRNA,腫瘤壞死因子a小干擾RNA)和BMP-2(BoneMorphogeneticProtein-2,骨形成蛋白2)基因的重組腺病毒對小鼠假體骨溶解模型的干預(yù)及評估,探討聯(lián)合基因治療人工關(guān)節(jié)假體周圍骨溶解的可能性。
　　方法:取8-10周齡BABL/C雌性清潔級小鼠240只隨機(jī)分為5組,每組48只:空白對照(A)組建

2、立假體模型,陽性對照(B)組、BMP-2治療(C)組、TNF-α-siRNA治療(D)組、聯(lián)合基因治療(E)組均建立假體松動模型。建模后兩周各組分別注射(PBS+24h后PBS)、(鈦顆粒懸濁液+24h后PBS)、(鈦顆粒懸濁液+24h后Ad5-BMP-2)、(鈦顆粒懸濁液+24h后Ad-TNF-α-siRNA)和(鈦顆粒懸濁液+24h后Ad-TNF-α-siRNA-BMP-2),各40ul,每隔兩周重復(fù)一次,正常喂養(yǎng)16周。各組分別于

3、12、16周行顯微CT掃描,后取材做HE、TRAP(TartrateResistantAcidPhosphatase,抗酒石酸酸性磷酸酶)、免疫組化染色,4、8、12、16周取材ELISA法檢測假體周圍TNF-α、BMP-2表達(dá)量。
　　結(jié)果:顯微CT、HE染色顯示,同時間點,B、C、D、E、A組假體周圍骨密度(BMD)及骨體積分?jǐn)?shù)(BVF)依次增高,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);炎性細(xì)胞組成的界膜組織厚度依次降低,除D、E之

4、間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)外,其他各組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);12、16w比較,僅有B、C組BMD、BVF出現(xiàn)降低,界膜增厚,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　TRAP染色顯示,同時間點,D、E組的破骨細(xì)胞數(shù)較B、C組有明顯減少,但較A組多,且差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);D、E組比較,B、C組比較破骨細(xì)胞數(shù)差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);各組12w、16w比較,僅B、C組破骨細(xì)胞出現(xiàn)增長,差

5、別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　TNF-α表達(dá)量與免疫組化染色光密度值(IOD)呈正相關(guān)性,12w結(jié)果顯示,D、E組中TNF-α表達(dá)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),均低于同期的B、C組,但高于A組,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　ELISA檢測顯示,同時間點,D、E組的TNF-α表達(dá)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)且均低于同期的B、C組,但高于A組,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。隨時間延長,A組內(nèi)

6、的TNF-α表達(dá)量的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),但其余各組都有不同程度增高,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。同時間點,C、E組BMP-2表達(dá)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)且均高于同期的A、B、D組,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。隨時間延長,A、B、D組內(nèi)的BMP-2表達(dá)量的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),C、E組逐漸增高,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:腺病毒攜帶TNF-α-siRNA及BMP