2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本課題將從臨床觀察持續(xù)性非臥床腹膜透析(CAPD)患者腹膜透析液內(nèi)皮素一1(endothelin一1,盯一1)水平,并從細(xì)胞水平探討局部內(nèi)皮素系統(tǒng)在腹膜纖維化形成中的作用機(jī)制,通過體外實(shí)驗(yàn)應(yīng)用非選擇性內(nèi)皮素受體拮抗劑(ETA/ETB受體拮抗劑PDl42893)對腹膜間皮細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),研究腹膜局部內(nèi)皮素系統(tǒng)在腹膜纖維化形成中的作用,探討腹膜纖維化的發(fā)生機(jī)制及治療策略。 研究方法:1.在本院定期隨訪的CAPD患者中選取26例患者,放

2、免法測定透析液及血漿中ET一1的表達(dá),通過腹膜平衡試驗(yàn)(PET)確定患者腹膜轉(zhuǎn)運(yùn)類型,記錄超濾量。通過Pearson相關(guān)分析,單因素方差分析和線性回歸方程,分析血漿與腹透液ET-1的表達(dá)和意義。以人腹膜間皮細(xì)胞株(HMrSV5)為研究對象,采用放免法、免疫細(xì)胞化學(xué)檢測不同時(shí)間、不同濃度的葡萄糖、甘露醇作用下人腹膜間皮細(xì)胞(peritonealmesothelialcell,HPMC)分泌的ET一1水平。采用半定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT

3、一PCR)檢測局部內(nèi)皮素系統(tǒng)ET一1、內(nèi)皮素受體(ETAR、ETBR)及內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶(ECE)的基因表達(dá)。2.相差顯微鏡下觀察HPMC細(xì)胞的形態(tài)改變,免疫細(xì)胞化學(xué)觀察細(xì)胞角蛋白(CK)、波形蛋白的表達(dá)。氚標(biāo)胸腺嘧啶核苷滲入法測定細(xì)胞增殖,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期。乳酸脫氫酶(LDH)測定細(xì)胞損傷。3.采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、放免法檢測不同濃度的葡萄糖、ET一1作用下IV型膠原(ColIV)、纖連蛋白(Fn)及轉(zhuǎn)化生長因子一β1

4、(TGF—B1)、白介素一1β(IL一1B)蛋白水平,RT一PCR檢測ColIV、Fn、基質(zhì)金屬蛋白酶一2(MMP一2)基因表達(dá),并在高糖和ET-1基礎(chǔ)上加入非選擇性內(nèi)皮素受體拮抗劑(PDl42893),觀察上述指標(biāo)的變化。免疫印跡法(Westernblot)檢測p38MAPK、磷酸化p38MAPK(P—p38MAPK)蛋白水平。 研究結(jié)果:1.透析液中ET一l的實(shí)測值明顯高于預(yù)測值(P

5、析液ET-1的濃度、內(nèi)皮素透析液血漿比值(D/PET-1)各組間均無顯著差異(P>O.05)。凈超濾量與透析液ET一1的濃度呈負(fù)相關(guān)。正常HPMC分泌低水平的ET一1,高濃度的葡萄糖可誘導(dǎo)HPMC分泌盯一1增加,呈時(shí)間和劑量依賴。HPMC表達(dá)完整的盯一1、ETAR、ETBR、ECEmRNA。高糖作用下盯一1、ETAR、ETBRmRNA表達(dá)增強(qiáng)。2.ET-1作用下,HPMC出現(xiàn)梭形改變,CK8和波形蛋白仍為強(qiáng)陽性表達(dá)。ET一1促進(jìn)HPMC

6、細(xì)胞DNA合成,呈劑量依賴。ET一l增加HPMC的損傷。3.ET-1促進(jìn)HPMC分泌Col工V、Fn及ColIV、Fn、MMP一2mRNA的表達(dá)。PDl42893可下調(diào)高糖誘導(dǎo)的ColIV、Fn和MMP一2。ET一1刺激HPMC分泌TGF一131、工L一113,呈劑量依賴。高糖和ET-1可激活HPMC細(xì)胞的p38MAPK信號通路,而PDl42893通過阻斷ET一1的作用,部分抑制高糖激活的p38MAPK信號通路。 結(jié)論:1.腹腔

7、盯一1可能部分來源于腹腔局部自分泌和旁分泌,腹膜超濾功能受損可能與腹腔盯一1水平有關(guān)。人腹膜間皮細(xì)胞存在內(nèi)皮素系統(tǒng),高濃度葡萄糖誘導(dǎo)其表達(dá)增加,HPMC可能是腹膜局部內(nèi)皮素一1的來源之一。2.ET-1對HPMC有促收縮作用,促增殖作用,同時(shí)加重HPMC損傷。ET一l未使HPMC發(fā)生表型轉(zhuǎn)化。3.ET-1有促HPMC細(xì)胞外基質(zhì)形成作用。ET一1誘導(dǎo)的ECM的形成可能與致纖維化因子TGF-β1的途徑有關(guān)。盯一1有促炎癥作用,進(jìn)一步促進(jìn)ECM

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