洛鉑對SGC-7901細胞凋亡及Akt,PTEN,ERK mRNA表達的影響.pdf

1、背景與目的:在全球,胃癌是最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率居惡性腫瘤的第四位,死亡率位居惡性腫瘤的第二位,在每年新發(fā)病例中近70％發(fā)生在發(fā)展中國家。胃癌占我國腫瘤死亡因素的首位,我國胃癌平均年死亡率約為25.2/10萬人口。胃癌是一個多因素、多階段交互作用形成的全身性疾病。手術、化療、放療是胃癌的主要治療手段。由于胃癌的特點,發(fā)現時多數已經是進展期,手術效果不佳,必須選擇綜合治療。目前,由于化療藥物易產生耐藥性,其療效有待于進一步提高。在

2、分子水平上,研究胃癌的發(fā)病機制,可以發(fā)現新的治療途徑,改善胃癌的預后。細胞生物學與分子生物學的研究進展,特別是信息通路研究的開展,開始了靶向治療及靶向藥物的新篇章。靶向藥物針對靶點發(fā)揮抗腫瘤作用,可以選擇優(yōu)勢人群,避免陪綁治療,使患者獲益。癌基因與抑癌基因的發(fā)現,及PTEN、ERK、AKT在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中作用的研究,為腫瘤的靶向治療提供新的靶點,提高了治療效果。本研究在體外觀察洛鉑對SGC-7901細胞凋亡及Akt、PTEN、ERKm

3、RNA表達的影響,為洛鉑在胃癌中的應用提供理論基礎,同時觀測AKT與ERK分別作為P13K/Akt/Mtor信號傳導通路和RAS/RAF/MEK/ERK信號傳導通路的關鍵點,在細胞信息傳導中發(fā)揮的關鍵作用。
　　 材料與方法:
　　 1、細胞株選用人胃癌細胞株SGC-7901細胞。
　　 2、化療藥選用洛鉑。
　　 3、MTT法分析測定不同時間、濃度干預胃癌細胞的生長抑制率,確定合適的流式檢測濃度。

4、>　　 4、流式細胞儀檢測不同濃度藥物干預的胃癌細胞,測定細胞的周期時相變化及凋亡情況。
　　 5、RT-PCR法檢測AKT、PTEN、ERKmRNA的表達情況。
　　 6、實驗數據經SPSS13.0統(tǒng)計處理,采用正態(tài)性檢驗,以P＜0.05表示差異顯著,P＜0.01表示差異非常顯著。
　　 結果:
　　 1、MTT法測定：洛鉑對細胞生長的抑制情況,經過統(tǒng)計學分析,實驗組各組與陰性對照組兩兩比較,OD值的

5、差異均有統(tǒng)計學意義,實驗組之間OD值的差異均有統(tǒng)計學意義,不同濃度的洛鉑對胃癌細胞在體外生長均有明顯的抑制作用,且隨著洛鉑濃度的增加和時間的延長,細胞抑制率明顯增高,呈現劑量時間依賴關系。
　　 2、流式細胞儀分析：不同濃度組洛鉑干預SGC-7901細胞48h后,測定凋亡細胞率,各處理組凋亡細胞百分率與對照組比較有統(tǒng)計學意義,表明洛鉑可以將SGC-7901細胞阻滯在S期,隨著藥物濃度的增高,阻滯率也增高,證明洛鉑可以誘導細胞凋亡

6、率的增高。
　　 3、不同濃度的洛鉑作用于SGC-7901細胞24h,48h后,PTENmRNA的表達增高,AKT、ERKmRNA的表達減少并且呈劑量時間依賴性,與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結論:
　　 1、洛鉑能抑制人胃癌SGC-7901細胞的生長,并且抑制強度呈劑量時間依賴性,隨洛鉑藥物劑量的增大時間的延長,對細胞生長抑制作用增強。
　　 2、洛鉑的抑癌作用與AKT、ERK、PTENmRNA

7、在胃癌中的表達有關,實驗顯示洛鉑干預后PTENmRNA的表達增加,AKT、ERKmRNA的表達減少。
　　 3、信息通路在細胞生長、凋亡過程中起關鍵作用,AKT是P13K/Akt/Mtor信號傳導通路的關鍵點,ERK是RAS/RAF/MEK/ERK信號傳導通路的關鍵點,在細胞信息傳導中發(fā)揮了關鍵作用。PTEN作為抑癌基因,可能抑制AKT及ERK基因的表達,進一步間接作用于這兩條信息通路,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中共同起作用。