PINX1與肝癌臨床病理特性的相關性研究.pdf

1、研究背景:
　　 腫瘤發(fā)生浸潤和轉移是復雜而有序的多階段生物學過程，受多個基因的調控，許多研究發(fā)現腫瘤的基因組存在遺傳不穩(wěn)定性，容易發(fā)生微衛(wèi)星不穩(wěn)定(microsatelliteinstablility，MSI)和雜合性缺失(lossofheterozygosity，LOH)。Pinx1(Pin2/TRFl-interactingprotein)是近年來在人及酵母細胞中發(fā)現的定位于染色體8p23這一位點的新端粒酶/端粒調控因子，

2、這一位點處在多種腫瘤的高頻雜合缺失區(qū)域，體外實驗和體內裸鼠成瘤實驗發(fā)現腫瘤細胞中PinX1或PinX1-TID的過表達能抑制端粒酶活性，使端?？s短[17]。而內源性PinX1的缺失則可增加端粒酶活性并延長端粒，也可增加裸鼠的腫瘤發(fā)生。在腎癌、卵巢癌和肺癌等研究中發(fā)現，Pinx1在癌組織中的表達明顯低于癌旁正常組織，說明PinX1基因可能參與控制細胞增殖。將PinX1基因導入SMMC-7721肝癌細胞后發(fā)現該細胞的生長受到明顯的抑制，說明

3、PinX1基因對肝癌細胞的生長是有抑制作用的，但關于PinX1基因在肝癌中的表達和遺傳不穩(wěn)定性與肝癌臨床病理關系的研究還鮮見報導，本文研究PinX1基因在肝癌中的LOH和MSI及PinX1蛋白的表達情況，分析其與肝癌臨床病理特性之間的關系，為闡明PINX1基因如何影響肝癌發(fā)生發(fā)展及研究抑癌基因在腫瘤中的作用機制提供理論依據。
　　 研究目的:
　　 研究Pinx1基因D8S277位點在肝癌中的微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)和雜合

4、性缺失(LOH)，以及這種遺傳不穩(wěn)定性在肝癌中對Pinx1蛋白表達的影響。闡明Pinx1基因遺傳不穩(wěn)定性以及Pinx1蛋白表達變化與肝癌發(fā)生、發(fā)展的關系，揭示Pinx1基因在肝癌中作為抑癌基因是怎樣影響肝癌發(fā)生發(fā)展，為研究抑癌基因在腫瘤中的作用機制提供理論依據。
　　 研究方法:
　　 (1)Pinx1蛋白的表達采用Envision免疫組織化學染色的方法進行檢測。(2)Pinx1蛋白表達檢測后采用Image-proPlu

5、s計算機圖像分析軟件進行分析。(3)石蠟包埋的肝癌組織DNA基因提取，采用苯酚-氯仿抽提法。(4)Pinx1基因D8S277位點的DNA基因提取后采用PCR-單鏈構象多態(tài)性(SSCP)方法進行擴增，并采用聚丙烯酰胺凝膠電泳及常規(guī)銀染檢測MSI及LOH。(5)采用SPSS軟件對數據進行相關性統(tǒng)計分析。
　　 研究結果:
　　 1)肝癌Pinx1基因微衛(wèi)星D8S277位點LOH的檢出率為35.71％(10/28)，與腫瘤的分

6、化程度有無淋巴結轉移、有無包膜浸潤及分期之間均不具有差異(P＞0.05)。2)MSI的檢出率為10.71％(3/28)，與腫瘤的分化程度有無淋巴結轉移、有無包膜浸潤及分期之間均不具有差異(P＞0.05)。3)Pinx1陽性蛋白在癌周正常組織高表達，在腫瘤組織中低表達或不表達，Pinx1陽性蛋白在肝癌患者腫瘤組織中的檢出率為32.14％(9/28)，與肝癌患者的有無淋巴結轉移、腫瘤的分化程度及分期之間不具有相關性(P＞0.05)，但與腫瘤

7、包膜浸潤之間具有相關性(P＜0.05)4)Pinx1蛋白表達與微衛(wèi)星D8S277位點的LOH及MSI之間不具有相關性(P＞0.05)。
　　 結論:
　　 在肝癌組織中存在Pinx1蛋白表達的下降，Pinx1蛋白的表達與腫瘤包膜浸潤之間具有相關性，是抑制腫瘤發(fā)展的影響因素，Pinx1基因微衛(wèi)星D8S277位點的MSI及LOH，與Pinx1蛋白表達及肝癌相關病理特性之間未見相關性，可能不是影響Pinx1蛋白表達及肝癌發(fā)生發(fā)