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文檔簡介
1、近年來隨著人民生活水平的提高,家庭和辦公用房的室內(nèi)裝潢已必不可少,人們在追求美好生活的同時(shí),卻被裝潢材料中的有害物質(zhì)困擾。裝潢材料中常有少量甲醛未被化合,可從裝潢材料中逐漸釋放出來污染室內(nèi)空氣,對人體產(chǎn)生危害。甲醛以其來源廣,毒性大,污染水平高,污染時(shí)間長等特點(diǎn),已經(jīng)成為我國最主要的室內(nèi)空氣污染物之一,也是世界環(huán)境衛(wèi)生領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。探討甲醛的遺傳毒性,毒性機(jī)制等,對全面和系統(tǒng)的了解甲醛的遺傳毒性的致癌性,進(jìn)一步評價(jià)和改善室內(nèi)空氣質(zhì)量
2、具有十分重要的意義,并為制定安全的環(huán)境和職業(yè)濃度提供更科學(xué)的依據(jù)。本文采用SDS-KCL沉淀法、PCR、RT-PCR等技術(shù),origin,gene-tool等生物信息學(xué)軟件分析手段,選用體外培養(yǎng)的HEK293細(xì)胞及Hela細(xì)胞為材料,對甲醛導(dǎo)致DPC及DPC的毒作用機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)研究。主要包括以下幾方面: 1.甲醛導(dǎo)致DNA.蛋白質(zhì)交聯(lián)效應(yīng)DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)(DNA-protein crosslinks,DPC)在正常細(xì)胞內(nèi)有一
3、定的背景值,行使一定的生物學(xué)功能,是DNA與核蛋白的正常聯(lián)系或其代謝結(jié)果,當(dāng)生物大分子受到外來環(huán)境污染物或化學(xué)致癌物(如甲醛)作用時(shí),則可誘導(dǎo)出超量的DPC,且DPC僅發(fā)生在單鏈上,這表明這種交聯(lián)只能發(fā)生在DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄期間,因此,形成DPC對DNA的構(gòu)象和功能(復(fù)制和轉(zhuǎn)錄)都會產(chǎn)生影響,又因與其他損傷相比較難修復(fù),因此在DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄時(shí)容易造成一些重要基因(如抑癌基因)的丟失。 本研究以體外培養(yǎng)的HEK293細(xì)胞為材料,設(shè)
4、置不同濃度,采用SDS-KCL沉淀法對甲醛致DPC效應(yīng)進(jìn)行了探討,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:液態(tài)甲醛在低濃度(62.5umol/L,125umol/L)時(shí),DPC含量與對照組沒有極顯著性差異,當(dāng)液態(tài)甲醛在高濃度(250umol/L,500umol/L,1000umol/L,2000umol/L)時(shí),DPC含量與對照組有極顯著性差異(P<0.01),因此,以大于或等于250umol/L作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的染毒濃度。 2.DPC對復(fù)制的影響自1969
5、年Brutlag首次報(bào)導(dǎo)甲醛可誘導(dǎo)DPC以來,關(guān)于DPC的研究大量都集中在對其生化特性,修復(fù)機(jī)制及其與甲醛的劑量效應(yīng)上,而關(guān)于其作為生物標(biāo)志物所產(chǎn)生的長期生物效應(yīng)的研究卻很少,有報(bào)道用基因芯片技術(shù)檢測出甲醛染毒后P344大鼠鼻呼吸道上皮細(xì)胞基因表達(dá)異常,其中,Rab26基因與CDKN2B基因表達(dá)量下調(diào)。本研究分別選HEK293細(xì)胞中的Rab26基因與Hela細(xì)胞中的CDKN2B基因,染毒后通過PCR技術(shù)體外擴(kuò)增,結(jié)果顯示:伴隨甲醛濃度增
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