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文檔簡介
1、本研究分為兩部分。
第一部分:新生鼠宮內(nèi)缺氧缺血性腦病模型的建立與評(píng)價(jià)。
目的:探討宮內(nèi)缺氧缺血性腦病模型的制作及評(píng)價(jià)方法。
方法:選用孕20天SD孕鼠,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(n=12)和對(duì)照組(n=3)。實(shí)驗(yàn)組結(jié)扎孕鼠子宮動(dòng)脈15分鐘,自然分娩,所生小鼠為宮內(nèi)全腦缺氧缺血損傷模型組小鼠;對(duì)照組為正常組孕鼠所生小鼠。記錄各組實(shí)驗(yàn)小鼠數(shù)目,計(jì)算死亡率。監(jiān)測D1~D16體重,觀察睜眼、耳廓展開時(shí)間,用神經(jīng)
2、反射測試、懸吊實(shí)驗(yàn)、礦場實(shí)驗(yàn)、拒俘反應(yīng)試驗(yàn)、轉(zhuǎn)棒儀實(shí)驗(yàn)及Morris水迷宮等對(duì)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組進(jìn)行運(yùn)動(dòng)功能與認(rèn)知功能評(píng)價(jià)。隨機(jī)取初生幼鼠做病理切片觀察。
結(jié)果:模型組胎鼠總數(shù)163只,死產(chǎn)率47.2%,1周內(nèi)死亡率6.9%。實(shí)驗(yàn)組體重增長較對(duì)照組緩慢,睜眼和耳廓展開時(shí)間較對(duì)照組延遲。部分神經(jīng)反射較對(duì)照組出現(xiàn)延遲;懸吊實(shí)驗(yàn)?zāi)P徒M懸吊時(shí)間明顯較對(duì)照組短(P<0.05);轉(zhuǎn)棒儀實(shí)驗(yàn)?zāi)P徒M停留時(shí)間明顯較對(duì)照組短(P<0.05);曠場
3、實(shí)驗(yàn)?zāi)P徒M小鼠穿格次數(shù)及糞便粒數(shù)明顯較對(duì)照組少(P<0.05),而站立次數(shù)與對(duì)照組相比無顯著性差異;拒俘反應(yīng)實(shí)驗(yàn)?zāi)P徒M小鼠較對(duì)照組難以抓取;Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)組小鼠獲取隱藏平臺(tái)位置時(shí)間較對(duì)照組明顯延長,在目的象限停留時(shí)間比對(duì)照組短。HE染色光鏡觀察,模型組大腦皮層及海馬區(qū)有炎性細(xì)胞聚集,神經(jīng)元細(xì)胞明顯減少,神經(jīng)元細(xì)胞變性壞死,膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性增生。
結(jié)論:結(jié)扎孕鼠子宮動(dòng)脈制備宮內(nèi)缺氧缺血?jiǎng)游锬P涂梢猿晒δ7氯祟怘I
4、E模型。
第二部分:臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療有效性研究。
目的:探索臍帶源性間充質(zhì)干細(xì)胞(UCMSCs)移植治療發(fā)育鼠缺氧缺血性腦?。℉IE)后遺癥的有效性。
方法:人臍帶組織經(jīng)膠原酶和胰蛋白酶消化后,分離、培養(yǎng)得到UCMSCs,DII標(biāo)記,制備并標(biāo)記UCMSCs。取子宮動(dòng)脈結(jié)扎制備的全腦缺血缺氧模型出生20天(D20)小鼠為實(shí)驗(yàn)組,隨機(jī)分為干細(xì)胞組(n=39)和PBS組(n=3
5、9);干細(xì)胞組經(jīng)枕大池穿刺注射DII標(biāo)記之UCMSCs,PBS組經(jīng)枕大池穿刺注射PBS液。于移植后1、6周,采用免疫組化方法檢測DII、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)、膠原纖維酸性蛋白(GFAP)。用懸吊實(shí)驗(yàn)、轉(zhuǎn)棒儀實(shí)驗(yàn)及Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行行為學(xué)評(píng)估,記錄各項(xiàng)評(píng)分。正常組孕鼠自然分娩,所生小鼠為對(duì)照組,與實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行同期對(duì)照。并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
結(jié)果:干細(xì)胞移植后1周、6周發(fā)現(xiàn)海馬區(qū)及皮質(zhì)運(yùn)動(dòng)
6、區(qū)出現(xiàn)DII、NSE、Nestin和GFAP陽性細(xì)胞。懸吊實(shí)驗(yàn),移植后2周干細(xì)胞組較PBS組、對(duì)照組懸吊持續(xù)時(shí)間長,三者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。轉(zhuǎn)棒儀實(shí)驗(yàn),移植后3周干細(xì)胞組較PBS組、對(duì)照組在轉(zhuǎn)棒儀上停留時(shí)間長,三者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),干細(xì)胞組、PBS組、對(duì)照組的平均潛伏期差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),不同時(shí)間平均潛伏期差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),組別與時(shí)間之間無明顯的交互
7、作用(p=0.0939)。空間探索實(shí)驗(yàn)單因素方差分析結(jié)果顯示,60s內(nèi)干細(xì)胞組、PBS組、對(duì)照組在目標(biāo)象限(3象限)游泳時(shí)間,三者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。干細(xì)胞組、PBS組、對(duì)照組第一次穿過平臺(tái)所在位置的時(shí)間,三者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
結(jié)論:人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)枕大池移植至缺氧缺血性腦損傷大鼠模型后,可遷移至海馬區(qū)與皮質(zhì)運(yùn)動(dòng)區(qū),并分化為神經(jīng)干細(xì)胞、神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞;外源性干細(xì)胞移植在一定程度上能促進(jìn)腦功
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