UCMSCs經(jīng)枕大池移植治療發(fā)育鼠HIE后遺癥實驗研究.pdf

1、本研究分為兩部分。
　　 第一部分：新生鼠宮內(nèi)缺氧缺血性腦病模型的建立與評價。
　　 目的：探討宮內(nèi)缺氧缺血性腦病模型的制作及評價方法。
　　 方法：選用孕20天SD孕鼠，隨機(jī)分為實驗組（n=12）和對照組（n=3）。實驗組結(jié)扎孕鼠子宮動脈15分鐘，自然分娩，所生小鼠為宮內(nèi)全腦缺氧缺血損傷模型組小鼠；對照組為正常組孕鼠所生小鼠。記錄各組實驗小鼠數(shù)目，計算死亡率。監(jiān)測D1~D16體重，觀察睜眼、耳廓展開時間，用神經(jīng)

2、反射測試、懸吊實驗、礦場實驗、拒俘反應(yīng)試驗、轉(zhuǎn)棒儀實驗及Morris水迷宮等對實驗組與對照組進(jìn)行運(yùn)動功能與認(rèn)知功能評價。隨機(jī)取初生幼鼠做病理切片觀察。
　　 結(jié)果：模型組胎鼠總數(shù)163只，死產(chǎn)率47.2％，1周內(nèi)死亡率6.9％。實驗組體重增長較對照組緩慢，睜眼和耳廓展開時間較對照組延遲。部分神經(jīng)反射較對照組出現(xiàn)延遲；懸吊實驗?zāi)Ｐ徒M懸吊時間明顯較對照組短（P＜0.05）；轉(zhuǎn)棒儀實驗?zāi)Ｐ徒M停留時間明顯較對照組短（P＜0.05）；曠場

3、實驗?zāi)Ｐ徒M小鼠穿格次數(shù)及糞便粒數(shù)明顯較對照組少（P＜0.05），而站立次數(shù)與對照組相比無顯著性差異；拒俘反應(yīng)實驗?zāi)Ｐ徒M小鼠較對照組難以抓取；Morris水迷宮實驗，實驗組小鼠獲取隱藏平臺位置時間較對照組明顯延長，在目的象限停留時間比對照組短。HE染色光鏡觀察，模型組大腦皮層及海馬區(qū)有炎性細(xì)胞聚集，神經(jīng)元細(xì)胞明顯減少，神經(jīng)元細(xì)胞變性壞死，膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性增生。
　　 結(jié)論：結(jié)扎孕鼠子宮動脈制備宮內(nèi)缺氧缺血動物模型可以成功模仿人類HI

4、E模型。
　　
　　 第二部分：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療有效性研究。
　　 目的：探索臍帶源性間充質(zhì)干細(xì)胞（UCMSCs）移植治療發(fā)育鼠缺氧缺血性腦?。℉IE）后遺癥的有效性。
　　 方法：人臍帶組織經(jīng)膠原酶和胰蛋白酶消化后，分離、培養(yǎng)得到UCMSCs，DII標(biāo)記，制備并標(biāo)記UCMSCs。取子宮動脈結(jié)扎制備的全腦缺血缺氧模型出生20天（D20）小鼠為實驗組，隨機(jī)分為干細(xì)胞組（n=39）和PBS組（n=3

5、9）；干細(xì)胞組經(jīng)枕大池穿刺注射DII標(biāo)記之UCMSCs，PBS組經(jīng)枕大池穿刺注射PBS液。于移植后1、6周，采用免疫組化方法檢測DII、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、巢蛋白（Nestin）、膠原纖維酸性蛋白（GFAP）。用懸吊實驗、轉(zhuǎn)棒儀實驗及Morris水迷宮實驗進(jìn)行行為學(xué)評估，記錄各項評分。正常組孕鼠自然分娩，所生小鼠為對照組，與實驗組進(jìn)行同期對照。并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。
　　 結(jié)果：干細(xì)胞移植后1周、6周發(fā)現(xiàn)海馬區(qū)及皮質(zhì)運(yùn)動

6、區(qū)出現(xiàn)DII、NSE、Nestin和GFAP陽性細(xì)胞。懸吊實驗，移植后2周干細(xì)胞組較PBS組、對照組懸吊持續(xù)時間長，三者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。轉(zhuǎn)棒儀實驗，移植后3周干細(xì)胞組較PBS組、對照組在轉(zhuǎn)棒儀上停留時間長，三者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。Morris水迷宮實驗，干細(xì)胞組、PBS組、對照組的平均潛伏期差別具有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05），不同時間平均潛伏期差別具有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05），組別與時間之間無明顯的交互

7、作用（p=0.0939）?？臻g探索實驗單因素方差分析結(jié)果顯示，60s內(nèi)干細(xì)胞組、PBS組、對照組在目標(biāo)象限（3象限）游泳時間，三者無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。干細(xì)胞組、PBS組、對照組第一次穿過平臺所在位置的時間，三者無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)枕大池移植至缺氧缺血性腦損傷大鼠模型后，可遷移至海馬區(qū)與皮質(zhì)運(yùn)動區(qū)，并分化為神經(jīng)干細(xì)胞、神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞；外源性干細(xì)胞移植在一定程度上能促進(jìn)腦功