靶向抑制轉(zhuǎn)錄因子Sp1阻斷類癌血管生成的系列研究.pdf

1、[研究背景]血管生成是腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟和靶向治療的研究重點。本研究擬評價核轉(zhuǎn)錄因子Spl作為抑制類癌血管生成高效靶點的價值；明確化療藥物光神霉素(Mithramycin-A)抑制Spl表達的分子機制；研究VEGF單克隆抗體BevacizLlmab(Avastin)阻斷VEGF信號轉(zhuǎn)導通路對Spl的影響；為開發(fā)兼顧轉(zhuǎn)錄因子Spl及其下游效應分子VEGF的“雙重靶向治療策略”提供實驗依據(jù)。 [資料與方法]用免疫組化染色檢測35例類

2、癌組織中Spl表達，評價Spl表達與VEGF、微血管密度(MVD)等因素及患者預后的關(guān)系。用RNA干擾技術(shù)(RNAi)敲低2株類癌細胞(NCI-H727及B0N-1)SDl表達，觀察該處理對VEGF表達的影響。用N0rtherrl blOt、westernbl0t及MTT方法評價光神霉素對類癌細胞Spl基因轉(zhuǎn)錄、翻譯和細胞體外增殖的影響。用熒光素酶報告基因技術(shù)(Luciferase assay)檢測光神霉素作用于Spl基因啟動子的確切位

3、點。利用裸鼠皮下移植瘤模型，評價BevacizLimab、光神霉素，以及兩藥聯(lián)合方案對類癌生長及血管生成表型的影響。 [結(jié)果]Spl蛋白在類癌組織中呈高表達狀態(tài)(74.3％，26/35)。Spl陽性表達與病灶大小、VEGF表達及MvD明顯相關(guān)(P=0.003，P=0.002，P=0.012)；并與患者不良預后有關(guān)(P=0.025)。用siRNA下調(diào)spl表達后，VEGF表達隨之下降。光神霉素可抑制類癌細胞SDl 基因轉(zhuǎn)錄與復制

4、，并影響其體外增殖；上述效應均呈劑量依賴性和時間依賴。報告基因檢測結(jié)果提示，光神霉素可抑制含2個spl結(jié)合位點 (TGGGcGG)的spl啟動子片斷活性(pGL3-FOR2)；對不含spl結(jié)合位點(pGL3-FORl)者則無此作用。體外培養(yǎng)環(huán)境下，Bevacizumab對類癌細胞生長及Spl、VEGF蛋白表達無影響；但可明顯抑制裸鼠皮下移植瘤生長及血管生成；并上調(diào)瘤體內(nèi)spl及VEGF表達。加用光神霉素可糾正上述變化，并增強Bevaci