轉(zhuǎn)錄因子Sp1反義寡婦苷酸對肝星狀細胞增殖、Sp1活性、TGF-β1及TIMP-1的影響.pdf

1、[目的]通過轉(zhuǎn)染Sp1反義寡核苷酸(ASODN)進入大鼠肝星狀細胞(HSC)，了解HSC的增殖、Sp1活性和TGF-β1、TIMP-1的mRNA表達情況，探討Sp1ASODN治療肝纖維化的可能機制。
　　 [方法]體外培養(yǎng)大鼠的HSC-T6細胞；應用合成的Sp1 ASODN通過脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染于HSC；臺盼藍染色法檢測Sp1 ASODN對HSC的毒性；CCK-8法檢測Sp1 ASODN對HSC增殖的影響；采用凝膠遷移率試驗(EMS

2、A)檢測HSC的Sp1活性改變；應用RT-PCR法檢測脂質(zhì)體介導的不同濃度Sp1ASODN(0.1、0.5、1.01μmol/L)對HSC-T6的TGF-β1mRNA和TIMP-1 mRNA表達的影響。
　　 [結(jié)果]在DNA用量為4μg(終濃度1μM)、脂質(zhì)體與DNA比例2:1、細胞融合度為80％～90％和細胞轉(zhuǎn)染作用時間為24h，Sp1 ASODN轉(zhuǎn)染到HSC-T6內(nèi)的效果最佳；Sp1 ASODN在0.1～1.0μmol/L

3、濃度對于體外培養(yǎng)傳代大鼠HSC無明顯毒性，但是在2.0μmol/L以上濃度時可能存在毒性；Sp1 ASODN濃度在0.1～1.0μmol/L時抑制HSC的增殖，以濃度1.0μmol/L抑制作用最明顯，呈劑量依賴性；應用Sp1 ASODN(0.1～1.0μmol/L)作用后，Sp1活性明顯減弱，呈劑量依賴性，同時減少HSC的TGF-β1、TIMP-1 mRNA表達，呈劑量依賴性。
　　 [結(jié)論]Sp1 ASODN在0.1～1.0μ