脂聯(lián)素通過(guò)AMPK和SP1抑制下丘腦GT1-7神經(jīng)細(xì)胞KISS-1基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá).pdf

1、目的：1.研究脂聯(lián)素對(duì)下丘腦GT1-7神經(jīng)細(xì)胞中KISS-1基因表達(dá)的影響。2.探討脂聯(lián)素對(duì)下丘腦GT1-7神經(jīng)細(xì)胞中KISS-1基因轉(zhuǎn)錄水平的影響。3.研究脂聯(lián)素影響KISS-1基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)的信號(hào)通路。
　　 方法：1.分別用不同濃度脂聯(lián)素作用于GT1-7細(xì)胞，用Realtime PCR方法觀察KISS-1基因mRNA表達(dá)的變化。2.建立KISS-1基因啟動(dòng)子報(bào)告基因體系，用Promega熒光素酶雙報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)不同濃

2、度脂聯(lián)素對(duì)GT1-7細(xì)胞KISS-1基因啟動(dòng)子活性的影響。3.用AMPK激動(dòng)劑AICAR、AMPK抑制劑Compound C和AMPKsiRNA作用于GT1-7細(xì)胞，再檢測(cè)脂聯(lián)素對(duì)KISS-1基因表達(dá)的影響。4.用不同濃度脂聯(lián)素、AICAR、Compound C和AMPK siRNA干預(yù)GT1-7細(xì)胞后，用Western Blot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子SP1蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：1.不同濃度脂聯(lián)素(0.1-5 ug/m1)作用

3、于下丘腦GT1-7神經(jīng)細(xì)胞后，可以抑制KISS-1基因mRNA的表達(dá)。2.不同濃度脂聯(lián)素(1-10 ug/ml)作用于下丘腦GT1-7神經(jīng)細(xì)胞不同時(shí)間(6-24h)后，可以抑制KISS-1基因啟動(dòng)子的活性，而且這種抑制作用呈時(shí)間和濃度依賴性。3.AMPK激動(dòng)劑AICAR可以抑制KISS-1基因的表達(dá)和啟動(dòng)子的活性，而AMPK抑制劑Compound C和AMPK siRNA都可以促進(jìn)KISS-1基因的表達(dá)和提高啟動(dòng)子的活性。4.脂聯(lián)素和A