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文檔簡介
1、第一部分神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角GLAST、GLT-1表達(dá)變化及肉毒桿菌毒素A的有效性
目的:觀察神經(jīng)病理性疼痛(NP)大鼠脊髓背角谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體-1(GLAST)及谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體-2(GLT-1)表達(dá)變化,觀察星型膠質(zhì)細(xì)胞GLAST和GLT-1的分布情況,檢測不同濃度肉毒桿菌毒素A(BTXA)的鎮(zhèn)痛有效性及安全性。
方法:選取120只雄性SD大鼠(150 g~180 g)隨機(jī)分為7組,實(shí)驗(yàn)一包括2組分別是假手術(shù)組(s
2、ham組,n=30),手術(shù)組(PSNL組,n=60),PSNL組大鼠行右側(cè)部分坐骨神經(jīng)結(jié)扎,sham組大鼠僅暴露并分離右側(cè)坐骨神經(jīng)。實(shí)驗(yàn)二建立PSNL模型后隨機(jī)分為5組分別是BTXA5組(n=6),BTXA10組(n=6),BTXA20組(n=6),BTXA40組(n=6),vehicle組(n=6)。BTXA5、BTXA10、BTXA20、BTXA40組分別為術(shù)側(cè)足底皮下注射濃度5U/kg、10U/kg、20U/kg、40U/kg的肉
3、毒桿菌毒素A,vehicle組單純注射溶劑。采取共聚焦免疫熒光檢測實(shí)驗(yàn)一中脊髓背角GLAST及GLT-1表達(dá)變化,雙重免疫熒光標(biāo)記星型膠質(zhì)細(xì)胞GLAST和GLT-1共表達(dá)情況,免疫印跡法(Western-blot)進(jìn)行GLAST、GLT-1定量。各組大鼠術(shù)前1天(基礎(chǔ)值)和術(shù)后1,3,5,7,14天均進(jìn)行機(jī)械痛閾(PWT)和熱痛閾(PWL)測定。
結(jié)果:PSNL組術(shù)后第3天術(shù)側(cè)機(jī)械痛閾(PWT)及熱痛閾(PWL)明顯下降,且均
4、持續(xù)至第14天,與sham組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。sham組大鼠PWT和PWL與術(shù)前相比未見明顯變化,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。Western blot結(jié)果顯示PSNL組GLAST術(shù)后3天表達(dá)增加伴隨少量表達(dá)持續(xù)至14天(P<0.05);GLT-1術(shù)后5天表達(dá)增加至10天后明顯下降(P<0.05)。sham組GLAST及GLT-1表達(dá)無變化。雙重免疫熒光結(jié)果顯示星型膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)GLT-1但未見GLAST表達(dá)。BT
5、XA5、BTXA10、BTXA20組機(jī)械痛閾(PWT)及熱痛閾(PWL)明顯提高,與vehicle組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。BTXA40組大鼠于注射藥物后第2天全部死亡。
結(jié)論:PSNL大鼠星型膠質(zhì)細(xì)胞主要表達(dá)GLT-1,星型膠質(zhì)細(xì)胞可能由于GLT-1下調(diào)誘導(dǎo)活化參與NP的發(fā)展。術(shù)側(cè)足底皮下注射肉毒桿菌毒素A(5-20 U/kg)均具有良好的鎮(zhèn)痛作用,且BTXA10組PWT和PWL測定數(shù)值穩(wěn)定性最好,但足底皮下注
6、射40 U/kg肉毒桿菌毒素A可致大鼠死亡。
第二部分肉毒桿菌毒素A上調(diào)GLT-1發(fā)揮抗神經(jīng)病理性疼痛作用
目的:研究BTXA對神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角GLT-1表達(dá)的影響。
方法:選取90只雄性SD大鼠(150 g~180 g)建立PSNL模型后隨機(jī)分為三組(n=30):A組(vehicle組),B組(單次術(shù)側(cè)足底皮下注射BTXA),C組(單次術(shù)側(cè)足底皮下注射BTXA+腹腔注射GLT-1抑制劑),其中C
7、組GLT-1抑制劑腹腔注射每天一次,直至第6天停止注射。測定各組大鼠術(shù)前1天(基礎(chǔ)值)和術(shù)后1,3,5,7,14天機(jī)械痛閾(PWT)和熱痛閾(PWL)。每組大鼠于術(shù)后不同時間點(diǎn)隨機(jī)取6只處死,采取共聚焦免疫熒光檢測大鼠右側(cè)腰5脊髓背角GLT-1表達(dá)變化,免疫印跡法(Western-blot)進(jìn)行相應(yīng)脊髓節(jié)段GLT-1定量。
結(jié)果:B組PWT和PWL明顯升高,與A組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 C組PWT和PWL于術(shù)后
8、3天明顯下降并維持至第6天,與B組同時期比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),但7天后PWT和PWL開始上升與B組同時期比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。B組GLT-1表達(dá)3天開始上調(diào),第7天達(dá)高峰并持續(xù)表達(dá)至14天,與A組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與B組比較,C組術(shù)后3天GLT-1表達(dá)明顯減少并持續(xù)至第6天(P<0.05),但7天后GLT-1表達(dá)開始逐漸增加(P>0.05)。
結(jié)論:單次足底皮下注射BTXA可
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