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文檔簡介
1、目的:
研究化療及不同濃度藏紅花素對急性白血病患兒骨髓間充質干細胞(BMSCs)增殖及功能的影響。
方法:
收集正常兒童,新發(fā)急性白血病患兒,化療6個月及化療1年后的急性白血病患兒骨髓各10例,全骨髓法培養(yǎng)出BMSCs,分別設為正常對照組(A),實驗組分為新發(fā)組(B),化療6月組(C)及化療12月組(D),并通過流式細胞儀測定細胞表面標記分子CD44、CD105、CD29、CD73、CD34、C
2、D45及HLA-DR的表達率,進行BMSCs鑒定。用含不同濃度藏紅花素(0、0.3125 mg/ml、0.625 mg/ml、1.25 mg/ml及2.5mg/ml)的低糖DMEM(L-DMEM)培養(yǎng)液分別培養(yǎng)各組BMSCs48h、72h及96h。倒置顯微鏡觀察各組BMSCs形態(tài)及增殖情況;MTT法檢測經不同濃度藏紅花素、不同時間作用后的各組BMSCs增殖率;ELISA法測定作用96小時后各組細胞上清液干細胞因子(SCF)及腫瘤壞死因子
3、-α(TNF-α)的水平。
結果:
1.BMSCs膜抗原表達:各組均有99.5%以上細胞表面表達CD44、CD105、CD29及CD73,而表達CD34、CD45及HLA-DR的細胞均低于2%。
2.BMSCs形態(tài)學變化:A組BMSCs形態(tài)規(guī)則,呈集落樣或“結網樣”迅速增殖,B組BMSCs形態(tài)較規(guī)則,但增殖速度明顯低于正常對照組;C及D組BMSCs形態(tài)不規(guī)則,增殖速度明顯低于A組。
4、 3.BMSCs增殖活性:實驗各組BMSCs在藏紅花素作用前培養(yǎng)48h、72h、96h后所測得OD值均低于A組OD值,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05),培養(yǎng)72h及96h后,D組OD值明顯低于C組OD值,差異有統(tǒng)計學意義,(p<0.05);加入不同濃度藏紅花素培養(yǎng)96h后,BMSCs增殖率均明顯提高(F值分別為19.85、5.42、9.31、9.58; p<0.05),當藏紅花濃度從0.3125mg/ml-1.25mg/ml時,增殖率逐
5、漸增加,以藏紅花素濃度為1.25mg/ml時的增殖率最高,與其他各組比較均有顯著性差異(p<0.05),當藏紅花素濃度升高至2.5mg/ml時,各組細胞增殖率反而下降。
4.BMSCs產生SCF及TNF-α水平:B組細胞產生SCF及TNF-α水平較A明顯升高(p<0.05),C及D組明顯低于B組(p均<0.05),D組明顯低于C組(p<0.05),但C組TNF-α水平仍顯著高于A組(p<0.05)。藏紅花素作用后,A組細胞
6、上清液中SCF水平明顯下降(F=25.49;p<0.05),以1.25mg/ml濃度組最低;C及D組經藏紅花素作用后,上清液SCF水平明顯升高(F=4.69,17.46;p<0.05),以1.25mg/ml組最高,而A及C組經濃度為0.625mg/ml及1.25mg/ml藏紅花素作用后,上清液中TNF-α水平明顯下降(F=5.58,6.12; p<0.05),亦以1.25mg/ml濃度組下降最明顯。
結論:
7、1.急性白血病患兒治療前BMSCs的形態(tài)及細胞表型與正常BMSCs無明顯差異,但其增殖活性明顯降低,產生SCF及TNF-α水平異常增高,提示急性白血病患兒骨髓發(fā)生了造血微環(huán)境的紊亂。
2.化療6月后急性白血病患兒BMSCs貼壁較前緩慢,形態(tài)不規(guī)則,增殖活性及產生SCF及TNF-α水平均明顯降低,提示化療可損傷BMSCs的形態(tài)、增殖活性及功能。
3.化療12月后急性白血病患兒BMSCs增殖活性及產生SCF及TN
8、F-α水平均較化療6月后明顯減低,提示化療強度越大,對BMSCs的損傷越明顯。
4.治療前急性白血病患兒BMSCs經藏紅花素作用后,增殖活性無明顯改變,但產生SCF及TNF-α水平較前明顯降低,提示藏紅花素可調節(jié)急性白血病患兒造血微環(huán)境紊亂。
5.化療6月后急性白血病患兒BMSCs經藏紅花素作用后產生TNF-α的水平明顯降低,提示藏紅花素可減輕造血抑制。
6.化療6月及12月后急性白血病患兒BM
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