2型豬鏈球菌ofs基因敲除株的構建及其N-片段的克隆表達.pdf

1、2型豬鏈球菌（Streptococcus suis serotype 2，S. Suis 2）是一種重要的人獸共患病病原。它不僅可感染豬致急性敗血癥、腦膜炎、關節(jié)炎、心內(nèi)膜炎及急性死亡，而且可通過傷口等傳播途徑感染人使人患腦膜炎、敗血病等疾病，對養(yǎng)豬業(yè)及相關從業(yè)人員均造成嚴重威脅。早期研究表明，與S. Suis 2致病性相關的毒力因子主要有莢膜多糖(Capsular polysaccharide，CPS）、溶菌酶釋放蛋白(Muramid

2、ase-released protein，MRP)、胞外因子(Extracellular factor，EF）、溶血素(Suilysin，SLY)等。但通過構建突變株及轉(zhuǎn)座子插入等技術證實，莢膜多糖是目前唯一公認的毒力因子。目前，S. Suis 2致病的具體機制仍不清楚。近年來國外研究表明，豬鏈球菌血清渾濁因子(Opacity factor of S. Suis，OFS)是豬鏈球菌中的一種重要的毒力因子。序列比對結果顯示：中國強毒株05

3、ZYH33中也存在OFS編碼基因，本研究以05ZYH33的基因組為模板，利用 PCR 技術擴增了ofs37-683序列，構建 pGEX4T-2:: ofs37-683原核表達質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化入 E. Coli BL21（DE3），初步得到了OFS37-683重組蛋白的表達產(chǎn)物。為進一步研究 ofs在豬鏈球菌感染中的作用，本研究通過同源重組的方法，成功構建了ofs 及ofs N-末端片段的基因敲除突變株。PCR和Southern雜交顯示 ofs