暫時性門體分流對大鼠冷缺血再灌注肝臟保護(hù)作用的研究.pdf

1、肝臟的冷缺血再灌注損傷是肝移植外科重要的臨床病理生理過程，影響到移植肝的近期和遠(yuǎn)期生存率，因此在移植手術(shù)過程中如何采取措施，減輕肝臟冷缺血再灌注損傷具有重要意義。實踐中大多數(shù)肝臟移植手術(shù)無肝期門靜脈處于阻斷狀態(tài)，加重內(nèi)臟淤血，全身血液動力學(xué)改變及生理機能紊亂，還可引起腸粘膜缺血、缺氧而受損，導(dǎo)致屏障功能障礙，同時腸道內(nèi)環(huán)境失衡，促使腸源性內(nèi)毒素產(chǎn)生移位，造成內(nèi)毒素血癥；無肝期結(jié)束門靜脈開放時，淤滯的門靜脈血再入肝臟，可激活內(nèi)毒素信號系統(tǒng)

2、，產(chǎn)生TNF-α、IL-6等大量炎性物質(zhì)，造成新肝的損傷。研究表明，大鼠在原位肝移植中無肝期延長導(dǎo)致死亡率增加，主要原因為門脈被阻斷后腸淤血引起的受體動物一系列病理生理改變。采用門體分流術(shù)可以減輕動物在無肝期引起的腸淤血，使內(nèi)臟區(qū)維持于近似正常的生理狀況，從而使動物能耐受較長的無肝期。無門脈淤血的單純肝缺血再灌注和門脈淤血灌注，二者所致的損傷機制可能不同。 本實驗采用大鼠門頸靜脈轉(zhuǎn)流下肝冷缺血再灌注的動物模型，分為無肝期門靜脈安

3、全時限內(nèi)阻斷與門靜脈完全分流兩組，比較了門靜脈分流和阻斷對再灌注后兩組大鼠肝臟的不同影響，為臨床上選取手術(shù)方式減輕移植肝冷缺血再灌注損傷提供參考。 實驗首先建立了大鼠門頸靜脈轉(zhuǎn)流下肝冷缺血再灌注的動物模型：用自制的門頸靜脈轉(zhuǎn)流管行頸外靜脈插管和門靜脈插管，完成門頸靜脈轉(zhuǎn)流；用自制的下腔靜脈內(nèi)置管置入肝下下腔靜脈，使下腔靜脈血經(jīng)插管回流心臟；0～4℃復(fù)方林格氏液經(jīng)門靜脈持續(xù)低溫灌洗保存肝臟，灌洗保存液從下腔靜脈內(nèi)置管外經(jīng)置管處切口

4、流出，灌注150min后恢復(fù)肝臟血流并關(guān)腹。并以此模型為基礎(chǔ)，確立大鼠無肝期耐受門靜脈血流阻斷的最長安全時限，即在術(shù)中阻斷門靜脈不同時間，觀察大鼠術(shù)后一周存活率。結(jié)果門靜脈阻斷35min組為30％，阻斷30min組術(shù)70％，阻斷25min組為100％，完全轉(zhuǎn)流組為100％。據(jù)此大鼠無肝期耐受門靜脈血流阻斷最長安全時限初步定為25min。 在此基礎(chǔ)上，進(jìn)行無肝期門靜脈分流和門靜脈阻斷25min兩組對比，從肝形態(tài)功能、能量代謝和細(xì)胞

5、凋亡幾方面觀察門靜脈分流對冷缺血再灌注肝臟的影響，以進(jìn)一步證明暫時性門體分流對大鼠冷缺血再灌注肝臟具有保護(hù)作用。動物分為安全時限內(nèi)阻斷組和完全分流組，并與正常組相比較，觀察各組動物術(shù)中胃腸、脾臟淤血情況及術(shù)后恢復(fù)情況；分別在術(shù)后1h、6h、24h、3d、7d活殺動物，觀察動物術(shù)后肝功能和肝組織病理改變、肝組織三磷酸腺苷含量、肝細(xì)胞線粒體呼吸控制率及磷氧比、肝細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果表明：(1)術(shù)中分流組動物門靜脈系統(tǒng)無淤血，復(fù)流后肝臟色澤很快

6、恢復(fù)，術(shù)后大鼠約2h后可站立，24h后能自由飲食及活動；而阻斷組動物阻斷門靜脈一段時間后可見胃腸道、脾明顯淤血，術(shù)后大鼠精神差，恢復(fù)時間延長，術(shù)中術(shù)后一般情況分流組動物明顯好于阻斷組。(2)兩組動物于手術(shù)后1h血清ALT、AST均值升高到峰值；術(shù)后血清ALT、AST值均逐漸有所下降；術(shù)后3d分流組動物先恢復(fù)正常，阻斷組動物7d后也恢復(fù)正常。阻斷組于術(shù)后各相應(yīng)時相點血清ALT、AST值均高于分流組，并且恢復(fù)正常也比分流組較晚(3)在術(shù)后1

7、h、6h、24h、3d各時相點，阻斷組動物血清ALT、AST值均顯著高于F組(p＜0.05)。(4)分流組動物術(shù)后1h、6h部分肝細(xì)胞變性壞死，肝組織內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤，肝小葉結(jié)構(gòu)基本完整，術(shù)后24h病理損傷好轉(zhuǎn)，到術(shù)后3d基本恢復(fù)正常。阻斷組動物術(shù)后1h、6h廣泛肝細(xì)胞變性壞死，部分肝小葉組織結(jié)構(gòu)破壞，術(shù)后24h、3d病理損傷逐漸好轉(zhuǎn)，到術(shù)后7d基本恢復(fù)正常。阻斷組動物在相同術(shù)后時間病理損害較分流組嚴(yán)重，恢復(fù)正常也比分流組晚。(5)術(shù)后各

8、時相點阻斷組RCR值和P/O均顯著低于分流組，恢復(fù)正常時間阻斷組也晚于分流組。(6)分流組于術(shù)后各相應(yīng)時相點肝細(xì)胞ATP含量均高于阻斷組，并且恢復(fù)正常也比阻斷組較早。(7)兩組肝細(xì)胞凋亡數(shù)于再灌注24h達(dá)到高峰，然后逐漸下降，術(shù)后相同時間分流組肝細(xì)胞凋亡數(shù)目明顯少于阻斷組，于再灌注7d后兩組凋亡無顯著差異。 結(jié)論：1.實驗中建立的大鼠門頸靜脈轉(zhuǎn)流下肝冷缺血再灌注模型簡單易行、手術(shù)時間短、術(shù)中插管時間短、重復(fù)性好、可排除血管吻合技