卵巢癌轉(zhuǎn)移相關(guān)N-糖鏈的發(fā)現(xiàn)及其在轉(zhuǎn)移中的功能研究.pdf

1、卵巢癌是致死率最高的婦科惡性腫瘤，且發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)。由于卵巢癌具有起病隱匿，早期缺乏典型臨床癥狀等特點(diǎn)，大多數(shù)患者確診時(shí)已為疾病晚期，此時(shí)已經(jīng)發(fā)生了大面積的轉(zhuǎn)移。發(fā)生了遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的卵巢癌，其治療效果差，死亡率高，5年生存率低于30％。轉(zhuǎn)移是卵巢癌重要的生物學(xué)特性，是導(dǎo)致卵巢癌患者死亡的主要原因。因此，尋找與卵巢癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的生物標(biāo)志物在卵巢癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的早期進(jìn)行診斷是必要而迫切的。
　　蛋白質(zhì)糖基化是最常見和最重要的翻譯后

2、修飾之一。糖基化修飾的異常，包括糖蛋白量的異常變化和/或其糖鏈結(jié)構(gòu)的異常改變，與諸多病理過程密切相關(guān)。大量研究表明，腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中往往伴隨著糖基化修飾的異常。這些異常的糖鏈結(jié)構(gòu)是惡性腫瘤的普遍特征，其中有些異常變化的糖鏈參與其惡性生物學(xué)行為的形成，促進(jìn)轉(zhuǎn)移并成為有用的腫瘤進(jìn)程監(jiān)測(cè)生物標(biāo)志物。因而，腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中異常變化的糖鏈為新的生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)提供了可靠的來源。目前，也有研究表明糖基化修飾在卵巢癌轉(zhuǎn)移過程中起著非常重要的作用

3、。例如，間皮素-MUC16結(jié)合促進(jìn)卵巢癌腹腔轉(zhuǎn)移，但是這一過程依賴于其表面的N-糖鏈。通過去除卵巢癌腫瘤細(xì)胞表面糖鏈的方式能夠改變細(xì)胞粘附透明質(zhì)酸的能力。這些研究表明，糖鏈在卵巢癌的轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要的作用，然而，N-糖鏈在卵巢癌轉(zhuǎn)移過程中的準(zhǔn)確變化以及特定類型的N-糖鏈在卵巢癌轉(zhuǎn)移中的作用尚不清楚。據(jù)報(bào)道，腫瘤細(xì)胞分泌上清中特異性改變的糖鏈有望成為腫瘤無創(chuàng)性診斷的生物標(biāo)志物。準(zhǔn)確而可靠地獲取這些糖鏈的結(jié)構(gòu)以及量的信息有助于腫瘤診斷標(biāo)

4、志物的發(fā)現(xiàn)。定量糖組學(xué)為其提供了有效而可靠的手段，不僅能區(qū)分樣品中結(jié)構(gòu)不同的糖鏈，還能揭示各種糖鏈豐度的不同。
　　本研究中，我們發(fā)展了適用于細(xì)胞上清的穩(wěn)定同位素代謝標(biāo)記定量糖組學(xué)的方法，并首次將其應(yīng)用到漿液性卵巢癌細(xì)胞株SKOV3及其高轉(zhuǎn)移株SKOV3-ip分泌上清N-糖鏈的定量研究。結(jié)果顯示，通過該方法我們首次揭示了漿液性卵巢癌細(xì)胞分泌上清中18種N-糖鏈的結(jié)構(gòu)和定量信息，發(fā)現(xiàn)其中17種N-糖鏈的表達(dá)水平存在差異。有意思的是，

5、與低轉(zhuǎn)移的漿液性卵巢癌細(xì)胞株SKOV3相比，平分型N-糖鏈(bisecting GlcNAc)的表達(dá)水平在高轉(zhuǎn)移的漿液性卵巢癌細(xì)胞SKOV3-ip中顯著降低，而β-1，6分支的N-糖鏈的表達(dá)水平則顯著升高。隨后，我們利用了綜合的分子生物學(xué)手段，包括凝集素印跡，實(shí)時(shí)熒光定量PCR，蛋白質(zhì)印跡，免疫組化，細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)在糖基轉(zhuǎn)移酶水平上對(duì)這兩種糖鏈的改變進(jìn)行了驗(yàn)證，并對(duì)其在卵巢癌轉(zhuǎn)移中的功能進(jìn)行了研究。我們的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，MG

6、AT3及其催化產(chǎn)物平分型N-糖鏈(bisecting GlcNAc)在漿液性卵巢癌細(xì)胞的遷移與侵襲中起抑制作用，而MGAT5及其催化產(chǎn)物β-1，6分支的N-糖鏈在漿液性卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲過程中起促進(jìn)作用。此外，我們還證明了這兩種N-糖鏈在卵巢癌細(xì)胞中是陰陽的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)證明，穩(wěn)定同位素代謝標(biāo)記的定量糖組學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的綜合策略為尋找卵巢癌轉(zhuǎn)移過程中特異性改變的糖鏈提供了可靠的方法。本研究首次全面揭示了卵巢癌細(xì)胞分泌上清中轉(zhuǎn)移