EIAV-,FDDV-疫苗株免疫馬后部分體液免疫指標的監(jiān)測與表達EIAV受體和熒光素酶報告基因的293細胞系的建立.pdf

1、為了闡明馬傳貧驢胎皮膚細胞弱毒疫苗株(FDDV<,11>-EIAV)體液免疫在免疫保護中的作用，為其它慢病毒疫苗的設計提供借鑒，將5匹EIAV陰性健康馬分為2組，第1組(6＃、7＃、8＃、 9＃馬)接1ml×10<-5'>TCID<,50>馬傳貧驢胎皮膚細胞弱毒疫苗株(EIAVFDDV<,11>)，第2組(5＃馬)接種1ml沒有接毒的驢胎皮膚細胞培養(yǎng)上清作為非免疫對照組。 免疫接種后210的天內，定期采集血清，利用ELISA方法

2、對不同試驗馬免疫后血清中針對EIAV結構蛋白p26以及囊膜蛋白的抗體進行了檢測，通過監(jiān)測p26以及囊膜蛋白特異性抗體滴度、p26蛋白特異性抗體的親和力變化、囊膜蛋白特異性抗體親和力和抗體構象變化，發(fā)現該疫苗株免疫馬后第3周出現針對p26以及囊膜蛋白的特異性抗體，其抗體滴度的個體差異性較大，但都維持在較低水平；p26以及囊膜蛋白的特異性抗體親和力雖有波動，但親和力水平較高；囊膜蛋白特異性抗體的構象指數都在2.0附近波動，表示囊膜蛋白特異性

3、抗體主要為構象性抗體。免疫100天后囊膜蛋白的特異性抗體水平沒有大的變化，p26抗體水平非常低，但其抗體親和力水平卻較高。免疫210天后，所有馬均用1ml×10<'-5>血清稀釋度EIAV強毒遼寧株(EIAV L-21)進行攻擊。攻毒前后對每匹馬進行體溫監(jiān)測，攻毒后，對照馬(5＃馬)在第10天出現發(fā)熱，第16天死亡，其它所有免疫馬未見體溫升高和其它臨床癥狀，說明FDDVll毒株能夠產生良好的免疫保護作用。研究表明馬傳貧驢胎皮膚細胞弱毒疫

4、苗株產生的體液免疫與馬傳貧致病株感染馬后產生的免疫保護中的體液免疫截然不同，暗示體液免疫在EIAV感染馬免疫保護中的作用可能需要進一步評價，同時也為其它慢病毒疫苗的設計提供參考。 此外，為了在體外精確、簡便地測定馬傳染性貧血病毒(EIAV)的中和抗體和研究不同毒株與受體親和性的差異，以真核表達質粒pcDNA3.1+為載體，插入馬慢病毒受體1(ELR1)基因、EIAV驢白細胞疫苗株DLA-122前病毒長末端重復序列(LTR)及其下

5、游的螢火蟲熒光素酶(Firefly luciferase)基因構建pELR1-LTR-Luc質粒，轉染293細胞，建立了ELR1-LTR(293-E)細胞系。該細胞系能穩(wěn)定表達ELR1基因，并且能在LTR的控制下有條件地促進螢火蟲熒光素酶基因的表達。當EIAV和ELR1結合進入細胞增殖時，表達病毒編碼的反式激活蛋白(Tat)能反式激活LTR，使螢火蟲熒光素酶基因的表達明顯增加。用1000TCID<,50>的EIAV驢胎皮膚細胞適應毒株D