牛瑟氏泰勒蟲p23表面蛋白基因與牛白細(xì)胞介素18基因在原核和真核細(xì)胞中的串聯(lián)表達(dá).pdf

1、牛瑟氏泰勒蟲病是由泰勒科、泰勒屬的瑟氏泰勒蟲（Theileria sergenti）寄生于牛的紅細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞內(nèi)，所引起的一種血液原蟲病。近年來隨著養(yǎng)牛業(yè)的不斷發(fā)展，牛瑟氏泰勒蟲病的發(fā)生也呈上升趨勢，嚴(yán)重影響相關(guān)國家的畜牧業(yè)發(fā)展。但由于目前尚無臨床應(yīng)用疫苗，而嚴(yán)重影響?zhàn)B牛業(yè)的健康發(fā)展。
　　因此，本研究從牛瑟氏泰勒蟲P23表面蛋白基因和牛白細(xì)胞介素-18基因著手，根據(jù) GenBank上報道的兩基因核苷酸序列，設(shè)計兩對特異引物，利

2、用SOE-PCR技術(shù)擴(kuò)增 p23-IL-18融合基因，將其克隆到 pMD18-T載體，構(gòu)建pMD18-T-p23-IL-18重組克隆質(zhì)粒，經(jīng)PCR和酶切鑒定后測序，再將p23-IL-18融合基因亞克隆到 pET-28a原核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建 pET-28a-p23-IL-18，并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，將表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE和Western blotting分析；以克隆質(zhì)粒pMD18-T-p23-IL-18為模板，經(jīng)PCR擴(kuò)增得到

3、用于真核表達(dá)的融合基因片段p23-IL-18，并將其克隆到pMD18-T上，在將融合基因亞克隆到真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX-I構(gòu)建pVAXI-p23-IL-18，經(jīng)PCR和酶切鑒定后，將表達(dá)轉(zhuǎn)染至BHK21細(xì)胞，收集培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行RT-PCR及IFA檢測。
　　結(jié)果表明，成功克隆了p23-IL-18融合基因，并在大腸桿菌中獲得表達(dá)，表達(dá)蛋白大小約為48 ku，可被牛瑟氏泰勒蟲陽性血清識別；成功構(gòu)建了牛瑟氏泰勒蟲 pVAXI-p23-IL-