牛瑟氏泰勒蟲MPSP基因雙T細(xì)胞表位的融合表達(dá)及免疫效果評價(jià).pdf

1、牛瑟氏泰勒蟲病是由泰勒科、泰勒屬的瑟氏泰勒蟲（Theileria orientalis）寄生于牛紅細(xì)胞和淋巴細(xì)胞內(nèi)引起的一種原蟲病，以高熱、貧血、消瘦和體表淋巴結(jié)腫大為主要臨床癥狀。感染該病的牛常常會(huì)成為該病的攜帶者，牛的健康生長和牛類產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量均會(huì)受到不同程度的影響。
　　MPSP（Major piroplasm surface protein）是牛瑟氏泰勒蟲的免疫優(yōu)勢抗原，是牛瑟氏泰勒蟲疫苗的候選抗原。本研究根據(jù)國內(nèi)外文

2、獻(xiàn)并結(jié)合表位分析軟件，選擇MPSP的2個(gè)優(yōu)勢T細(xì)胞表位區(qū)（E1，E2），運(yùn)用重疊延伸PCR（SOE-PCR）將2個(gè)表位基因串聯(lián)，克隆至pMD-18T載體，并構(gòu)建原核表達(dá)載體pGEX-4T-E1-E2和真核表達(dá)載體pVAX-E’1-E’2，進(jìn)行原核表達(dá)和真核表達(dá)，應(yīng)用Western blot、IFAT等技術(shù)鑒定表達(dá)情況。結(jié)果顯示，SOE-PCR擴(kuò)增2個(gè)T細(xì)胞表位片段大小為361bp，Western blot分析原核表達(dá)融合蛋白大小為39

3、ku，并具有較好的反應(yīng)原性；RT-PCR和IFAT檢測融合T表位基因在Vero細(xì)胞中獲得了瞬時(shí)表達(dá)。
　　在進(jìn)行原核表達(dá)和真核表達(dá)的基礎(chǔ)上，又進(jìn)行了動(dòng)物免疫試驗(yàn)。將48只雌性BALB/c小鼠，隨機(jī)分為6組（A組為R-融合雙表位免疫組，B組為R-MPSP蛋白免疫組，C組為pVAX-E’1-E’2免疫組，D組為pVAX-MPSP免疫組，E組為pVAX1對照組，F(xiàn)組為PBS對照組），每組8只，進(jìn)行動(dòng)物免疫試驗(yàn)。應(yīng)用間接ELISA方法檢測