牛瑟氏泰勒蟲18S rRNA基因的克隆及PCR診斷方法的建立.pdf

1、牛瑟氏泰勒蟲病是由泰勒科、泰勒屬的瑟氏泰勒蟲（Theileria sergenti）寄生于牛紅細胞和淋巴細胞而引起的一種血液原蟲病。近些年，瑟氏泰勒蟲病的發(fā)生呈上升趨勢，給相關(guān)國家的畜牧業(yè)帶來了較大的經(jīng)濟損失，引起了國內(nèi)外獸醫(yī)界的廣泛關(guān)注。因此有必要建立一種快速、敏感、特異診斷方法，以便進行牛瑟氏泰勒蟲病的早期診斷和預(yù)防。
　　本試驗根據(jù)GenBank中報道的牛瑟氏泰勒蟲18S rRNA基因序列，設(shè)計了兩對特異性引物，擴增兩條特異

2、性基因片斷，再去除重復(fù)區(qū)，經(jīng)過拼接得到牛瑟氏泰勒蟲18S rRNA基因全序列，進行核苷酸序列分析及同源性比較。再以牛瑟氏泰勒蟲18S rRNA基因為靶基因，設(shè)計特異性引物建立PCR診斷方法，并進行應(yīng)用試驗。
　　結(jié)果表明，PCR擴增出長為1173 bp和1440 bp兩條特異性基因片斷，去除重復(fù)區(qū)拼接得到全長為1744 bp的牛瑟氏泰勒蟲18S rRNA基因序列。同源性比較結(jié)果表明，牛瑟氏泰勒蟲(Theileria sergent

3、i)與水牛泰勒蟲(Theileria buffeli)同源性最高，為99％，與突變泰勒蟲同源性最低，為95%。建立的PCR診斷方法不與新孢子蟲、弓形蟲、羊泰勒蟲發(fā)生交叉反應(yīng)，最高敏感度DNA為5.3 fg/μL。對50份樣本DNA進行檢測，本方法陽性檢出率(64.0%)高于金春梅方法陽性檢出率(58%)。
　　本研究為我國瑟氏泰勒蟲分子分類學(xué)、遺傳學(xué)以及診斷工作奠定理論基礎(chǔ)，為牛瑟氏泰勒蟲病的診斷、流行病學(xué)調(diào)查提供特異、快速、靈敏