馬凡綜合征FBN1、TGFBR2基因型表型關(guān)聯(lián)研究及他汀類藥物對血管內(nèi)皮功能改善效果的臨床薈萃分析.pdf

1、第一部分、馬凡綜合征FBN1基因型表型關(guān)聯(lián)研究
　　 研究背景：
　　 馬凡綜合征(Marfansyndrome，MFS，OMIM154700)是一種常染色體顯性遺傳病，可累及心血管、骨骼、眼部等多個結(jié)締組織系統(tǒng)。原纖維蛋白-1基因(Fibrillin-1gene，F(xiàn)BN1)是MFS的最常見的致病基因包括。目前共發(fā)現(xiàn)大于1750種FBN1基因突變可以導(dǎo)致MFS，突變的位點隨機分布在整個FBN1基因中，沒有明顯的熱點突變。

2、每一位FBN1基因攜帶者都有可能發(fā)生嚴(yán)重心血管病變、骨骼累及和眼部病變。MFS患者的表型復(fù)雜，變異性大，基因型表型之間的聯(lián)系不明確。
　　 研究目的：
　　 通過篩查中國人群的FBN1基因突變譜，探索致病突變基因型與MFS表型的關(guān)系。
　　 研究方法：
　　 研究納入在阜外心血管病醫(yī)院收集的馬凡綜合征家系的先證者和散發(fā)病例，共55例，納入的研究對象間無血緣關(guān)系。納入120例無血緣關(guān)系的正常人作為對照組。應(yīng)

3、用直接測序的方法檢測FBN1基因突變位點，采集患者臨床資料，進(jìn)行基因型表型分析。
　　 研究結(jié)果：
　　 本研究共篩查出FBN1基因突變30個，其中首次報道的新突變26個，F(xiàn)BN1基因突變檢出率為54.5％(30/55)。符合Ghent診斷標(biāo)準(zhǔn)的馬凡綜合征患者的FBN1基因突變檢出率為71.8%(28/39)。120例對照組成員均未發(fā)現(xiàn)以上FBN1基因突變。所有拴出FBN1基因突變中錯義突變16個，無義突變12個，移碼突

4、變2個。93.3%的患者累及心血管系統(tǒng)(28/30)，其中符合心血管系統(tǒng)主要診斷標(biāo)準(zhǔn)的有21例(21/28)；93.3%的突變攜帶者有骨骼系統(tǒng)的異常累及(28/30)，其中15例患者符合豐要診斷標(biāo)準(zhǔn)(15/28);66.7%的基因突變攜帶者有眼部累及(20/30)，9例有晶狀體異位。
　　 基因型-表型研究發(fā)現(xiàn)：FBN1基因突變攜帶者累及心血管系統(tǒng)和骨骼系統(tǒng)的比例顯著高于眼部(兩組比較的P值均等于0.021);FBN1基因突變攜

5、帶者符合心血管系統(tǒng)主要診斷標(biāo)準(zhǔn)的比例顯著高于符合眼部主要診斷標(biāo)準(zhǔn)的比例(70.0%VS.30.0%，P=0.004);位于FBN1基因半胱氨酸區(qū)域的突變攜帶者發(fā)生晶狀體脫位的比例顯著高于不位于半胱氨酸區(qū)域攜帶者(100.0%VS.19.2%，P=0.008);提前終止密碼子(Prematureterminationcodon，PTC)突變攜帶者符合心血管系統(tǒng)主要診斷標(biāo)準(zhǔn)的比例顯著高于非PTC突變攜帶者(92.9%VS.50.0%，P=0

6、.017)。
　　 結(jié)論：
　　 我們的研究拓展了中國人群的FBN1基因突變譜，篩查出30個FBN1基因突變位點?；蛐?，表型研究結(jié)果表明，F(xiàn)BN1基因突變攜帶者累及心血管系統(tǒng)和骨骼系統(tǒng)的比例顯著高于眼部；位于FBN1基因半胱氨酸區(qū)域的突變攜帶者發(fā)生晶狀體脫位的比例顯著高于不位于半胱氨酸區(qū)域攜帶者；PTC突變攜帶者的主動脈瘤和/或主動脈夾層的發(fā)生率顯著高于其它類型突變攜帶者。對MFS患者進(jìn)行早期基因診斷，根據(jù)攜帶的FBN

7、1基因突變類型預(yù)測其表型，可以及時監(jiān)測疾病的發(fā)生和進(jìn)展，防止嚴(yán)重病變的發(fā)生，對于MFS的防治有重要的意義。
　　 第二部分、2型馬凡綜合征TGFBR2基因型表型關(guān)聯(lián)研究
　　 研究背景：
　　 馬凡綜合征（Marfansyndrome，MFS，OMIM#154700）是一種常見結(jié)締組織疾病，呈常染色體顯性遺傳。典型的馬凡綜合征可累及骨骼、眼部和心血管等多個系統(tǒng)。MFS最常見的致病基因為定位于染色體15q21.1的

8、原纖維蛋白基因-1（fibrillin-1gene，F(xiàn)BN1）。2型馬凡綜合征(type2Marfansyndrome，MFS2，OMIM#154705)由轉(zhuǎn)化生長因子2型受體（transforminggrowthfactorbetareceptorⅡgene，TGFBR2）基因突變導(dǎo)致。TGFBR2是轉(zhuǎn)化生長因子基因家族的重要成員之一，編碼跨膜蛋白激酶受體參與轉(zhuǎn)化生長因子β(transforminggrowthfactorbeta,T

9、GF-β)配體家族的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。TGFBR2基因突變和MFS2之間確切的基因型一表型關(guān)聯(lián)還沒有明確。
　　 研究目的：
　　 本研究報道了一個中國2型馬凡綜合征家系的臨床特征和致病基因篩查結(jié)果。同時探索了TGFBR2基因F-螺旋區(qū)域突變和和突變攜帶著臨床表型之間的關(guān)系。
　　 研究方法：
　　 本研究納入研究對象為在阜外心血管病醫(yī)院門診收治的患有MFS的先證者和其所有家系成員。共納入100個無血緣關(guān)系的正常

10、人作為對照。入選病例（先證者、家系成員）和對照組成員均經(jīng)詳細(xì)詢問病史、體格檢查及常規(guī)檢查。我們提取了研究對象外周血基因組DNA，使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction，PCR)擴增目的片段，對FBN1基因和TGFBR2基因的編碼區(qū)進(jìn)行了直接測序。使用了SWISS-MODEL工具建立TGFBR2蛋白3D模型，預(yù)測TGFBR2基因突變所造成的影響，并對同一功能域的TGFBR2突變進(jìn)行了基因型和表型關(guān)聯(lián)分析。

11、>　　 研究結(jié)果：
　　 先證者可以確診為2型馬凡綜合征。在先證者及家系成員中發(fā)現(xiàn)一個新的TGFBR2基因錯義突變p.V453E(c.1358T＞A)，這個突變位于TGFBR2的激酶結(jié)構(gòu)域的F-螺旋。TGFBR2基因V453E突變使疏水性纈氨酸被親水性的谷氨酸取代，形成了額外的氫鍵，從而改變了的F-螺旋的結(jié)構(gòu)，影響了TGFBR2的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，表現(xiàn)為突變攜帶者的是2型MFS表型。文獻(xiàn)回顧和基因型-表型分析發(fā)現(xiàn)，93.8%

12、的F-螺旋基因突變攜帶者(15/16)有符合主要診斷標(biāo)準(zhǔn)的心血管累及，只有4例有眼部的輕微累及(4/16，25%)，所有攜帶者均沒有晶狀體異位。F-螺旋基因突變攜帶者心血管系統(tǒng)和骨骼系統(tǒng)受累及的比例顯著高于眼部（兩組比較的P值均小于0.01）所有突變攜帶者中,37.5%的患者(6/16)可以診斷為2型MFS，但是只有12.5%的患者(2/16)完全符合Ghent診斷標(biāo)準(zhǔn)。
　　 結(jié)論：
　　 本研究在2型馬凡綜合征的家系

13、中發(fā)現(xiàn)了1個新的TGFBR2基因突變p.V453E(c.1358T＞A)。攜帶TGFBR2基因F-螺旋區(qū)域突變的患者更容易出現(xiàn)嚴(yán)重的心血管事件和骨骼病變。攜帶此區(qū)域基因突變的患者更容易在年輕時出現(xiàn)嚴(yán)重的臨床表型。攜帶F-螺旋TGFBR2基因突變的患者的眼部病變發(fā)生率較低。這些發(fā)現(xiàn)對2型馬凡綜合征以及其他TGF-β通路相關(guān)疾病的基因檢查、診斷和治療有重要意義。
　　 第三部分、他汀類藥物對血管內(nèi)皮功能改善效果的臨床薈萃分析

14、　　 研究背景：
　　 糖尿病是一種影響人類健康的重要疾病。糖尿病和心血管疾病聯(lián)系緊密，常伴有甘油三酯水平升高，低密度脂蛋白膽固醇水平升高及高密度脂蛋白膽固醇水平降低等血脂異常，可引起內(nèi)皮功能障礙。內(nèi)皮功能障礙是心血管疾病的獨立危險因子之一。血流介導(dǎo)的血管舒張反應(yīng)(flow-mediateddilation，F(xiàn)MD)是應(yīng)用超聲測量一氧化氮介導(dǎo)的血管舒張反應(yīng)，在臨床上應(yīng)用廣泛的內(nèi)皮功能檢測方法。臨床研究顯示，F(xiàn)MD值降低與糖尿病

15、，胰島素抵抗，高膽固醇血癥，高血壓，高齡，肥胖等多種心血管疾病危險因素相關(guān)。體外研究和臨床研究認(rèn)為，他汀類藥物(Statins)具有改善血管內(nèi)皮功能的作用。而對于他汀類藥物是否可以改善糖尿病患者的血管內(nèi)皮功能，臨床研究的結(jié)論不一，存在著爭議。因此，非常有必要重新評估他汀類藥物對糖尿病患者血管內(nèi)皮功能的影響。
　　 研究目的：
　　 本臨床薈萃分析歸納了目前為止所有納入糖尿病患者的隨機、雙盲、安慰劑對照試驗，觀察他汀類藥物

16、治療一段時間后，患者血管內(nèi)皮功能(FMD值)的變化，以明確他汀類藥物治療是否可以改善糖尿病患者的血管內(nèi)皮功能，同時探索其影響因素，為他汀類藥物在糖尿病患者的合理應(yīng)用指明方向。
　　 研究方法：
　　 根據(jù)Cochrane干預(yù)試驗系統(tǒng)評價手冊和QUORUM指南，對研究他汀類藥物對糖尿病患者血管內(nèi)皮功能的臨床干預(yù)實驗進(jìn)行薈萃分析。研究者首先對PubMed、Cochranelibrary、Embase數(shù)據(jù)庫和相關(guān)資料進(jìn)行系統(tǒng)檢

17、索。應(yīng)用隨機效應(yīng)模型（random-effectmodels），以加權(quán)平均差（weightedmeandifference，WMD）計算他汀類藥物干預(yù)前后FMD變化值。為探索影響效應(yīng)的試驗因素，根據(jù)納入實驗研究對象的基本特征進(jìn)行了亞組分析及Meta回歸分析（meta-regressionanalyses）。
　　 研究結(jié)果：
　　 Meta分析納入了10個隨機安慰劑對照研究(randomizedandplacebo-co

18、ntrolledstudies，RCT)以分析他汀類藥物對糖尿病患者內(nèi)皮功能的改善作用，包括487名他汀類藥物作為干預(yù)組的糖尿病患者和358名使用安慰劑的對照組患者。薈萃分析結(jié)果顯示他汀類藥物可以顯著改善糖尿病患者的血管內(nèi)皮功能(WMD:0.94%;95%CI:0.38%，1.50%;P＜0.001)。由于納入研究間存在異質(zhì)性(x2=27.5;I2：67%;P=0.001)，我們進(jìn)行了亞組分析和Meta回歸分析。亞組分析結(jié)果顯示，他汀類

19、藥物可以顯著改善BMI≤27.6kg/m2的糖尿病患者的血管內(nèi)皮功能(納入5個研究：I2：14%;WMD:1.52%;95%CI:1.19%，1.85%;P＜0.001)，但是對于BMI＞27.6kg/m2的患者，他汀類藥物對內(nèi)皮功能無改善作用(納入5個研究：I2：0%;WMD:0.11%;95%CI:-0.47%，0.70%;P=0.70)。同時，他汀類藥物也明顯改善了：平均年齡≤55歲、舒張壓≤80mmHg、1型糖尿病、基線LDL-

20、c水平≤3.32mmol/L、基線甘油三酯水平≤1.56mmol/L和基線HDL-c水平>1.25mmol/L的糖尿病患者的血管內(nèi)皮功能。Meta回歸分析結(jié)果與亞組分析結(jié)果一致，納入研究對象的平均年齡、納入研究對象的BMI指數(shù)、納入研究對象的高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)基線水平、納入研究對象收縮壓基線水平和舒張壓基線水平為影響Meta分析異質(zhì)性的原因。
　　 結(jié)論：
　　 我們的薈萃分析顯示，他汀類藥物治療可以顯著改