漢族MFS患者FBN1、TGFBR2和TGFBR1基因突變分析.pdf

1、目的：
　　 分析本地區(qū)漢族馬凡綜合征(Marfan syndrome，MFS)患者的原纖維蛋白-1(Fibrillin-1，F(xiàn)ib-1)基因(FBN1)、轉(zhuǎn)化生長因子-β受體2(Transforming growth factorbeta receptor typeⅡ，TGFBR2)基因和轉(zhuǎn)化生長因子-β受體1(Transforming growthfactor beta receptor TypeⅠ，TGFBR1)基因突變情

2、況，能夠進一步明確相應MFS患者的發(fā)病原因，并可為他們家系成員的癥狀前檢測或下一代的產(chǎn)前篩查提供依據(jù)。
　　 方法：
　　 應用聚合酶鏈反應(PCR)和變性高效液相色譜法(Denaturing high-performanceliquid chromatography,DHPLC)對MFS先證者的FBN1、TGFBR2和TGFBR1進行突變篩查，然后對DHPLC初篩異常的DNA片段進行測序分析。在檢出突變位點后，對先證者

3、家系成員和隨機采集的120例正常對照的相應DNA片段進行DHPLC篩查和序列分析，同時分析新發(fā)突變的突變位點與蛋白結(jié)構(gòu)域的關(guān)系，以及通過蛋白三維結(jié)構(gòu)模擬的方法對新發(fā)現(xiàn)的突變進行致病性分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.在9例無血緣關(guān)系的MFS先證者中發(fā)現(xiàn)FBN1的4種致病性突變(其中2種為新的突變)具體為：
　　 (1)第55號外顯子的復合突變，包含第55號外顯子的缺失突變c.68626871delGGCTGTGTA

4、G(p.Gly2288MetfsX109)、同義突變c.6861A＞G和內(nèi)含子的突變c.[IVS55+1_IVS55+11delGTAAGAGGATC；IVS55+34dupCATCAGAAGTGACAGTGGACA]，為新的突變。
　　 (2)第20號外顯子2462位堿基發(fā)生置換(c.2462G＞A)，造成錯義突變(p.Cys821Tyr)，為新的突變。
　　 (3)第46號內(nèi)含子+5位堿基發(fā)生置換(c.IVS46+5

5、G＞A)，造成剪接位點的改變，為己報道的突變。
　　 (4)第27號外顯子3373位堿基發(fā)生置換(c.3373C＞T)，造成無義突變(p.Arg1125X)，為已報道的突變。
　　 2.先證者家系成員中，患者檢出與先證者相同的突變，健康者和120例正常對照均未發(fā)現(xiàn)相同的突變。
　　 3.突變位點與蛋白結(jié)構(gòu)域的關(guān)系分析顯示：兩種新發(fā)現(xiàn)的突變p.Gly2288MetfsX109和p.Cys821Tyr均位于Fib-1

6、重要的結(jié)構(gòu)域即鈣結(jié)合類表皮生長因子(Calcium binding epidermal growth factor-like，cbEGF)基序上，且都使得該結(jié)構(gòu)域上高度保守的半胱氨酸殘基產(chǎn)生不同程度的改變。
　　 4.蛋白三維結(jié)構(gòu)進行模擬顯示：p.Gly2288MetfsX109和p.Cys821Tyr突變均導致蛋白三維結(jié)構(gòu)發(fā)生了不同程度的變化。
　　 此外，也發(fā)現(xiàn)了FBN1的6種單核苷酸多態(tài)性(Single nucle

7、otide polymorphisms，SNPs)：c.3442C＞G(p.Pro1148Ala)、c.IVS34-10C＞T、c.IVS41-22 insT、c.IVS45+29insT、c.IVS56+17C＞G和c.IVS62+8A＞C，其中c.IVS34-10C＞T、c.IVS41-22 insT為新發(fā)現(xiàn)的SNPs。未發(fā)現(xiàn)TGFBR2和TGFBR1的突變。
　　 結(jié)論：
　　 1.FBN1的缺失突變c.[6862

8、_6871delGGCTGTGTAG；IVS55+1_IVS55+11delGTAAGAGGATC](p.Gly2288MetfsX109)、錯義突變(p.Cys821Tyr)、剪接位點突變(c.IVS46+5G＞A)和無義突變(p.Arg1125X)很可能是相應MFS患者的致病原因。
　　 2.FBN1、TGFBR2和TGFBR1突變篩查，能夠進一步明確相應MFS患者的發(fā)病原因，并可為他們家系成員的癥狀前檢測或下一代的產(chǎn)前篩查