靶向survivin基因治療人肝細(xì)胞癌的相關(guān)研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文靶向survivin基因治療人肝細(xì)胞癌的相關(guān)研究姓名：陳濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：普通外科（肝膽）指導(dǎo)教師：田伏洲2002.5.1反義寡核瞢酸抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用機(jī)制及其相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。結(jié)果l l 、4 8 例肝癌組織中有3 1 例s u r v i v i n 蛋白表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率6 4 ．6 ％。S u r v i v i n 在肝癌組織中的表達(dá)與腫瘤分化程度有關(guān)，與其余臨床病理特征無(wú)關(guān)。在E d m o

2、 n d s o n 分級(jí)I ～Ⅱ級(jí)患者其表達(dá)顯著低于Ⅲ～Ⅳ級(jí)患者。2 、肝癌組織中s u r v i v i n 表達(dá)與細(xì)胞增殖凋亡比有關(guān)，s u r v i v i n 表達(dá)陰性者肝癌細(xì)胞增殖凋亡比顯著低于表達(dá)陽(yáng)性者。S u r v i v i n 表達(dá)陰性患者與表達(dá)陽(yáng)性者比較，其一年生存率無(wú)顯著差異，但三年生存率顯著高于后者。3 、脂質(zhì)體介導(dǎo)s u r v i v i n 反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染人肝癌S M M C ．7 7 2 1 細(xì)

3、胞后，細(xì)胞內(nèi)s u r v i v i n 蛋白及m R N A 表達(dá)顯著降低：同時(shí)細(xì)胞貼壁率顯著降低，細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受抑制，生長(zhǎng)抑制率最高可達(dá)7 1 ．8 2 ％，至轉(zhuǎn)染后一周仍可維持一定的生長(zhǎng)抑制作用。4 、透射電鏡觀察可見(jiàn)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)呈凋亡樣改變，如染色質(zhì)濃縮、斷裂及凋亡小體形成等。激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞骨架微絲系統(tǒng)發(fā)生了劇烈的變化，微絲失去了其均勻致密排列有序的結(jié)構(gòu)，或發(fā)生斷裂，其平均熒光強(qiáng)度顯著降低。5 、流式

4、細(xì)胞儀檢測(cè)見(jiàn)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡顯著增加，并出現(xiàn)G 2 ／M 期阻滯現(xiàn)象。R T ．P C R 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)c y c l i n B l m R N A 含量顯著增加。6 、正常7 7 2 1 細(xì)胞中p 3 8 M A P K 和c a s p a s e ．3 有一定量的基礎(chǔ)表達(dá)，但其活性很低，s u r v i v i n 反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染對(duì)其表達(dá)無(wú)明顯影響，但轉(zhuǎn)染后p 3 8 M A P K 及c a s p a s e ．3

5、 活性均顯著升高，其中p 3 8 M A P K 活性升高發(fā)生于c a s p a s c - 3 活性升高之前，應(yīng)用特異性p 3 8 M A P K 活性抑制荊S B 2 0 2 1 9 0 作用后可以顯著抑制p 3 8 M A P K 及c a s p a s e 一3 的活性。結(jié)論：1 、s u r v i v i n 在肝癌組織中的表達(dá)具有普遍性，其表達(dá)與E d m o n d s o n 分級(jí)及肝癌細(xì)胞增殖凋亡比有關(guān)，s u

6、r v i v i n 的表達(dá)對(duì)促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖、抑制其凋亡具有重要作用，同時(shí)s u r v i v i n 的表達(dá)也可作為預(yù)后不良的重要指標(biāo)。2 、脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染針對(duì)s u r v i v i n m R N A 啟動(dòng)子區(qū)的反義寡核苷酸可在蛋白及m R N A 兩個(gè)水平上有效地降低肝癌S M M C - 7 7 2 1 細(xì)胞內(nèi)s u r v i v i n 的表達(dá)，并能夠有效抑制肝癌細(xì)胞的增殖活性，s u r v i v i n 可以